2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12671107
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
中村 二郎 名古屋大学, 医学部, 助教授 (40283444)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
茶谷 貞男 名古屋大学, 医学部, 助手 (30313993)
濱田 洋司 名古屋大学, 医学部, 助手 (20293706)
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| Keywords | 糖尿病性神経障害 / シュワノーマ細胞 / ポリオール代謝 / プロティンキナーゼC / アルドース還元酵素阻害薬 |
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| Research Abstract |
培養ラットシュワノーマ細胞(JS-1細胞)を用い、神経細胞におけるPKC活性と増殖能に対する高濃度グルコースおよびポリオール代謝の影響を検討した。
【方法】1)細胞培養:JS-1細胞を5.5mMグルコース(C)および20mMグルコース(HG)条件下でアルドース還元酵素阻害薬epalr estat(Ep)(1μM)の存在下および非存在下で14日間培養した後、以下の実験に供した。2)細胞増殖能の測定:[^3H]-thymidine(Thy)取り込み能(×10^3dpm/mg protein)を指標としてJS-1細胞の増殖能を測定した。3)PKC活性の測定:ジギトニンを用い、in situでのPKC活性(pmol/min/mg protein)を測定した。4)PKC isoform蛋白発現量の測定:超遠心法により細胞質および膜分画の蛋白を分離し、western blot analysisによりそれぞれの分画のPKCisoform蛋白発現量を測定した。【成績】1)細胞増殖能:HGによりThy取り込み能は有意に低下し(C;123.3±6.0、HG;87.4±3.6、p<0.05)、この低下はEpにより有意に抑制された(HG+.Ep;110.8±7.1、p<0.05)。2)PKC活性:HGにより有意に低下したPKC活性(C;2.35±0.08、HG;1.72±0.06、p<0.05)は、Epにより正常化された(HG+Ep;2.39±0.12、p<0.05)。3)PKCisoform蛋白発現量:細胞質分画のPKCisoform蛋白発現量には有意な変化が認められなかったのに対し、膜分画においてはPKC-α蛋白発現量のみがHGにより有意に低下し、この低下がEpにより改善された。
【結論】JS-1細胞では、高グルコースによりPKC、とりわけPKC-α活性の低下および細胞増殖能の抑制が惹起され、Epによりこれらの異常が改善することが明らかとなり、神経系細胞におけるポリオール代謝活性の亢進に伴うPKC活性の低下および細胞増殖能の低下が糖尿病性神経障害の発症・進展に深く関与している可能性が示唆された。
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Research Products
(1 results)
