DPC4/Smad4遺伝子発現アデノウイルスベクターによる膵癌治療の試み

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671202
• Research Institution: CHIBA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 小林 進 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (50234828)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 落合 武徳 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (80114255) ; 西郷 健一 千葉大学, 医学部附属病院, 助手 (60323424) ; 白澤 浩 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (00216194)
• Keywords: DPC4 / Smad4 / 癌関連遺伝子 / DPC4 / Smad4 / アデノウイルスベクター / 遺伝子治療 / 膵癌 / 遺伝子発現

Research Abstract

DPC4(Deleted in Pancreas Carcinoma, Locus4)遺伝子は1996年、ジョンズ ホプキンス大学S.E.Kern博士らにより、クローニングされた。そのDPC4/Smad4,cDNA遺伝子(pDPC4-wt3,4.4kb)をS.E.Kern博士より提供を受け、E.Coliを用い,pBluescript II SK(+) phagemidの形で遺伝子を複製した。それをBamH1(Start codonより10塩基) EcoR1(Stop codonより18塩基)で切断しDPC4/Smad4 cDNA(1660bp)を回収し、アデノウイルス発現ベクター作成用コスミッドDNAにDPC4/Smad4,cDNA遺伝子を、In-vitro Packageを用いて逆向きに組み込みを試みた。しかし、Large Scale, Small Scaleに戻り、再度、cDNAの取り出しを繰り返し行なったが、遺伝子の確認がとれなかった。S.E.Kern博士に連絡をとるも、原因は判明せず、現在はPCR法に変更し、DPC4/Smad4 cDNA(1660bp)を回収を試みており、DPC4/Smad4発現アデノウイルスベクターを作製する作業を繰り返し行っているが、未だ完成に至っていない。
また、このDPC4/Smad4発現アデノウイルスベクターの作成と平行して、膵癌を含め、消化器癌のp21^<WAF1/CIP1>、K-rasの遺伝子発現、変異の検討を行ない、英文誌上で発表した。

Research Products

• [Publications] Kobayashi, S., et al.: "p21^<WAF1/CIP1> messenger RNA expression in hepatitis B, C virus infected human hepatocellular carcinoma tissues"Cancer. 91. 2096-2103 (2001)
• [Publications] Ito, Y., Kobayashi, S., et al.: "Frequent detection of K-ras mutation in stool samples of colorectal carcinoma patients after improved DNA extraction"International Journal of Oncology. 20. 1263-1268 (2002)