胃癌におけるCRTFのTIMP-I制御因子としての意義

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671281
• Research Institution: KURUME UNIVERSITY
• Principal Investigator: 青柳 慶史朗 久留米大学, 医学部, 講師 (20202492)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 加藤 誠也 久留米大学, 医学部, 助教授 (60268844) ; 金澤 昌満 久留米大学, 医学部, 助手 (00268898) ; 宮城 委史 久留米大学, 医学部, 助手 (80309806) ; 古閑 敦彦 久留米大学, 医学部, 助手 (90320217)
• Keywords: 胃癌 / TIMP-1 / 転写因子 / CRTF / 腹膜播種 / アデノウイルスベクター / サイトカイン / ヌードマウス

Research Abstract

平成12年度は、前立腺癌の培養細胞株であるPC-3におい同定されたCRTFが胃癌培養細胞であるMKN-45をはじめとする消化器癌培養細胞株においてもCRTFを介したTIMP-1産生経路の存在を明らかにした。また、胃癌培養細胞株MKN-45,MKN-28にTIMP-1遺伝子を組み込んだアデノウイルスベクターAdvCMV TIMP-1のin vitro感染実験を行い、TIMP-1の導入効果を明らかにした。平成13年度は、MKN-45を用いてinvasion assayを施行し、TIMP-1導入による浸潤抑制効果を認め、MKN-45より高頻度腹膜転移培養細胞株作成を開始した。平成14年度は高頻度腹膜転移培養細胞株(MKN-45P)を樹立し、血清腹水を伴う胃癌腹膜播種モデルを作成した。MKN-45PをTIMP-1Adv感染群、Lac-zAdv感染群、Non-Virus(NV)群に分けヌードマウス腹腔内に投与し、6週後の体重、腹膜播種性結節の数、重量、血性腹水の有無について検討した。TIMP-1Adv感染群は、Lac-zAdv感染群、NV群に比較し、結節数重量は有意に減少し、血性腹水は認められなかった。体重は有意差は認めなかったが、TIMP-1感染群は、Lac-zAdv感染群、NV群に比較し、減少傾向は軽度であった。平成15年度はMKN-45およびMKN-45Pの培養上清中のIL-1β,IL-6,IL-8,IL-10,HGF,VEGE,TGFβ、MMP-2,MMP-9,TIMP-1の蛋白濃度をELISA法にて測定し、MKN-45PはMKN-45に比べ、IL-6,IL-8,MMP-2,VEGFの分泌が高度であることが判明し、ヒト大網由来の線維芽細胞との混合培養では、MKN-45において線維芽細胞との接触によるTIMP-1の上昇がMKN-45Pに比べ顕著であった。以上よりTIMP-1遺伝子導入が胃癌腹膜播種を抑制すると考えられ、その転写因子であるCRTFは腹膜播種抑制に関与する可能性が示唆された。