Research Abstract |
免疫的同系ラットを使用して,大動脈及び子宮より採取した平滑筋細胞を凍結心筋傷害モデルに移植し,血管新生の誘発,血管増殖因子の分泌,さらに心筋能改善について評価を行った. 方法:Lewis雌性ラットの胸部大動脈および子宮・卵管よりそれぞれ大動脈平滑筋細胞(ASMC)および子宮平滑筋細胞(USMC)を採取し,第2世代まで継代培養後,液体窒素内で凍結保存を行った.同系Lewisラットを用いて,液体窒素にて冷却した金属プローブにて貫壁性心筋傷害モデルを作成した.心筋傷害3週後に,ASMC,USMを瘢痕組織内中央に移植し,コントロールとして培養液を注入した.細胞移植5週後に心臓を摘出し,Langendorff灌流で心機能を測定した.その後,3mm厚に心臓をスライスしデジタル画像化し,computerized planimetry法により左室容積,左室、瘢痕組織の壁厚と面積を測定した.Factor VIII免疫染色,H&E染色を行い,瘢痕組織内・境界部位のcapillary density(CP)を光学顕微鏡下で計測した。ASMC群においてはelatica van Gieson(evG)染色を行い,瘢痕組織部位をデジタル画像化し,NIHイメージプログラムを用いて,エラスティン・総コラーゲン領域を算出した.細胞移植5週後に心臓を摘出しmicrospheresを冠動脈内に灌流し,瘢痕組織内のDisintegrations per minute(DPM)をneutron activation technologyを用いて測定した固定組織標本より,任意に瘢痕組織部位を摘出し,slot blotting解析にて,瘢痕組織内のVEGFおよびbFG)蛋白を定量した. 結果:瘢痕組織内VEGF定量ではASMC群,USMC群は共にコントロール群(C群)に比して高値を示した.しかし,bFGFは有意差を認めなかった.ASMC群およびUSMC群共に移植5週後の瘢痕組織内でBrdU陽性細胞を多数認めた.また,瘢痕組織内および境界部位において,ASMC群,USMC群は共にコントロール群より有意に多くのCPを認めた.瘢痕組織内のDPMおよび局所血流係数は,ASMC群では有意にUSMC群とコントロール群より高かった.しかし,VSMC群とC群では有意差は認めなかった.左室容積,瘢痕組織面積においていずれの群も有意差は認めなかった.瘢痕組織の壁厚においてASMC群,USMC群共にC群より有意に厚く,瘢痕組織-左室面積比はASMC群,USMC群は共にC群より有意に小さかった.evG染色において,エラスティンは黒色,コラーゲンはピンク色を呈した.瘢痕組織内におけるエラスティン,総コラーゲン領域はASMC群がC群より有意に大きかった.Systolic,developed pressureにおいてASMC群,USMC群は共にC群より有意に高かった.
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