子宮内膜癌のエストロゲン依存性増殖におけるサイクリン発現の分子機構の解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671587
• Research Institution: Shinshu University School of Medicine
• Principal Investigator: 塩沢 丹里 信州大学, 医学部・附属病院, 講師 (20235493)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小西 郁生 信州大学, 医学部, 教授 (90192062) ; 二階堂 敏雄 信州大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (50180568)
• Keywords: 子宮内膜 / 子宮内膜癌 / エストロゲン / サイクリン / c-Jun / サイクリン依存性燐酸化酵素(cdk) / 転写因子

Research Abstract

子宮内膜腺上皮細胞および一部の子宮内膜癌はエストロゲン受容体(ER)を発現しエストロゲン依存性の増殖を呈するがその機序は不明である。一方近年細胞増殖にはサイクリンをはじめとする細胞周期調節因子が深く関与することが明らかになった。今回の研究では、エストロゲン(E2)による子宮内膜腺上皮細胞およびER陽性子宮内膜癌Ishikawa細胞の増殖機序を細胞周期調節因子の観点から解析することを目的とした。血清除去した培養子宮内膜腺上皮細胞にE2を添加し各種細胞周期調節因子の発現をWesternblottingにて観察したところ、サイクリンがD1→E→A→Bの順に発現されたことから、子宮内膜腺上皮のE2による増殖にはサイクリンD1の発現が重要であると考えられた。次にE2によるサイクリンD1発現の機序を解明するために、サイクリンD1プロモーターを利用したルシフェラーゼアッセイを施行したところ、腺上皮細胞ではサイクリンD1遺伝子上流に存在する初期転写調節因子であるAP-1蛋白が結合するAP-1結合配列がサイクリンD1の転写活性に重要であることが判明した。また正常内膜腺上皮細胞ではE2によりAP-1蛋白が誘導されること、加えて、ゲルシフトアッセイにより、サイクリンD1プロモーターのAP-1配列はE2刺激した正常内膜腺上皮細胞の核蛋白と結合することが判明し、正常内膜のE2による増殖においてはAP-1を介したサイクリンD1発現が極めて重要であることが判明した。一方、Ishikawa細胞でもE2によってサイクリンD1が発現することが認められたが、ルシフェラーゼアッセイによりその発現にはAP-1を介さない経路の存在が示唆され、正常内膜とは異なるE2依存性増殖機序が存在する可能性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Shiozawa T. etal.: "Up-regulation of p27Kip1 by progestins is involved in the growth suppression of the normal and malignant human endometrial glandular cells"Endocrinology. 142. 4182-4188 (2001)
• [Publications] Shiozawa T. etal.: "Expression of the cell cycle regulator p27Kip1 in normal squamous epithelium, cervical intraepithelial neoplasia, and invasive squamous cell carcinoma of the uterine cervix. Immunohistochemistry and functional aspects of p27Kip1"Cancer. 92. 3005-3011 (2001)
• [Publications] Shiozawa T.: "Down-regulation of estrogen receptor by the methy lation of the estrogen receptor gene in endometrial carcinoma"Anti cancer Res.. (in press). (2002)
• [Publications] Shiozawa T.: "Involvement of the cell cycle-related molecules in Steroid hormone-dependent growth of the normal and neoplastic human endometrium"Acta obst. Gynaec Jpn.. 52. 1179-1189 (2000)
• [Publications] Shiozawa T. etal.: "Involvement of cyclin-dependent kinase inhibitor p27kipl in growth inhibition of endometrium in the Secretory phase and hyperplastic endometrium trexted with progesterone"Mol. Hum. Rep.. 4. 899-905 (1998)
• [Publications] Shiozawa T. etal.: "Immunohistochemical detection of cyclin A with reference to p53 expression in human endometrial endometrioid carcinoma"Int. J. Gynecol. pathol.. 16. 348-353 (1997)
• [Publications] 塩沢丹里, 小西郁生: "IV 子宮頚部の形態と機能 新女性医学大系1 性器の発生・形態・機能(藤井信吾編集)"中山書店. 30 (2001)