PTEN発現ベクター導入による不死化ヒト卵巣表層上皮細胞株の形質変化について

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671616
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 片渕 秀隆 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (90224451)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田代 浩徳 熊本大学, 医学部, 助手 (70304996)
• Keywords: ヒト卵巣表層上皮 / 上皮性卵巣癌 / PTEN遺伝子 / LH受容体遺伝子 / Cip1 / Waf1遺伝子 / ICAM1遺伝子 / インテグリン / 足場非依存性増殖

Research Abstract

本研究課題において用いる不死化ヒトOSE細胞株は正常ヒト卵巣表層上皮(OSE)へのSV40 large T antigen導入により樹立されたもので、この中において軟寒天培地上で高率にコロニー形成能を有するOSE2b2株は、ヌードマウス腹腔内への移植によって、腹水産生を伴う播種性の癌腫形成がみられた。また、同一症例のOSEより得られたOSE2a株は、コロニー形成能は低率でこのような造腫瘍性はみられなかった。これらの2つの細胞株において上皮性卵巣癌に関連する代表的な遺伝子の変異の有無ならびに発現の変化の有無を調べた。まず、上皮性卵巣癌に高率にみられるp53遺伝子の変異の有無に関しては、direct sequenceによる解析で両者の細胞株において変異は認められなかった。また、上皮性卵巣癌に関連するsex steroid hormone receptor、gonadotropin receptor、gonadotropin releasing hormone receptorの発現を調べた結果、腫瘍形成能を有しない細胞株OSE2a株においてluteinizing hormone receptor (LHR)の発現がみられたものの、腫瘍形成能を有する細胞株OSE2b2株ではLHRの発現がみられなかった。また、Atlas Human cDNA Expression Array (Clontech)を用いて、既知の588遺伝子の発現の変化の有無を調べたが、これらに含まれる癌遺伝子や癌抑制遺伝子の発現は両者において差がみられなかった。両細胞株で差異を認めた遺伝子は、cyclin dependent kinase 2 (CDK2) inhibitorであるCip1/Waf1ならびにCip2遺伝子、接着因子であるICAM-1遺伝子で、また、軽度の発現の差がインテグリンならびにカドヘリンにおいて認められた。さらに、LHRの発現を有するOSE2aにおいて、hCG投与により、異なった濃度で足場依存性の細胞増殖と非依存性の細胞増殖が観察された。特に、コロニー形成能の低いOSE2aで高度のhCGを添加することで、この形成能の亢進が観察された。また、OSE2aにおいて、hCG投与によりインテグリンの発現の変化もみられた。一方、内在性のPTENの発現をRT-PCR法を用いて観察したところ、両者に発現が確認されたが、hCG投与によるFTENの発現変化は観察されなかった。

Research Products

• [Publications] Nitta M., Katabuchi H., et al.: "Characterization and tumorigenicity of human ovarian surface epithelial cells immortalized by SV40 large T antigen"Gynecoligic Oncology. 81. 10-17 (2001)
• [Publications] Okamura H., Katabuchi H.: "Detailed morphology of human ovarian surface epithelium focusing on its metaplastic and neoplasitc capability"Italian Journal of Anatomy and Embryology. 106. 263-276 (2001)
• [Publications] 片渕秀隆, 岡村 均: "ヒト卵巣表層上皮の生理と病理 -上皮性卵巣がんの腫瘍発生の観点から-"日本婦人科腫瘍学会雑誌. 20. 292-304 (2002)
• [Publications] Okamura H., Katabuchi H., at al.: "What we have learned from isolated cells from human ovary?"Molecular and Cellular Endocrinology. (In press). (2003)
• [Publications] Katabuchi H, Okamura H.: "Review : Cell biology of human ovarian surface epithelial cells and ovarian carcinogenesis"Medical Electron Microscopy. (In press). (2003)
• [Publications] Hata K., Dhar D.K., Kanasaki H., Fujiwaki R., Katabuchi H., et al.: "Serum endostatin levels in patients with epithelial ovarian cancer"Anticancer Research. (In press). (2003)
• [Publications] Okamura H., Katabuchi H., et al.: "Structural changes and cell properties of human ovarian surface epithelium in ovarian pathophisiology"Eds., Pietro M. Motta, Stefania A. Nottola, and Guido Macchiare(In press). (2003)