2001 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
12671735
|
|---|
| Research Institution | Chiba University |
|---|
Principal Investigator |
吉田 英生 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (60210712)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
幸地 克憲 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (40312938)
田川 雅敏 千葉県がんセンター, 病理研究部, 部長 (20171572)
松永 正訓 千葉大学, 医学部・附属病院, 講師 (80302561)
|
|---|
| Keywords | 神経芽腫 / 遺伝子治療 / サイトカイン |
|---|
| Research Abstract |
1)Midkineプロモーターと自殺遺伝子(単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ遺伝子)を挿入したベクターの作製と遺伝子導入腫瘍細胞の作製
Midkineは悪性度の高い神経芽腫に強く発現しているのでMidkineプロモーター領域に注目した。そしてMidkineのゲノム遺伝子を用いて、その領域の転写活性化を検討し、5'上流約550bpの領域に腫瘍細胞特異的な転写活性を認めることを確認し、このプロモーター領域の下流に自殺遺伝子(単純ヘルペスウィルスのチミジンキナーゼ遺伝子(HSV-TK))を結合させレトロウィルスベクターを作製した。
2)in vitro実験
上記で作製したベクターをヒト神経芽腫細胞NGPに感染させ、MidkineをプロモーターとしHSV-TK遺伝子が導入された腫瘍細胞(MK-TK)を作成した。MK-TK、NGP wild type(WT)、HSV-TK遺伝子のみを導入したNGP(TK-R)の3種類の細胞を用いて実験を行なった。これら細胞をplateにまき、各濃度のガンシクロビールを添加培養し、viabilityを測定した。MK-TK群において、ガンシクロビール濃度依存性にviable cell数の減少を認め、viabilityの低下を認めた。他の2群はviabilityに大きな変化は認めなかった。
|
