ヘリックス・ループ・ヘリックス型転写因子DEC1の軟骨分化過程における役割

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671809
• Research Institution: HIROSHIMA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 河本 健 広島大学, 歯学部, 助手 (50224861)
• Keywords: DEC1 / 転写因子 / 軟骨 / 細胞分化

Research Abstract

ヒトおよびマウスのDEC1遺伝子をクローニングして、上流約3kbを含む全長約9kbの一次構造を決定したところ,DEC1遺伝子は,5つのエクソンと4つのイントロンから構成されており,プロモータ領域には,3つのE boxを含むさまざまなエレメントが存在することが明らかになった.また,転写開始点付近にはTATAボックスはなく,その代わりに複数のGCボックスが認められた.
DEC1遺伝子プロモータから,さまざまな長さの異なる断片を作製し,プロモータ活性測定用ベクターにクローニングして,培養細胞へ導入したところ,-260bpまでを持つクローンに高いプロモータ活性が認められた.さまざまな転写因子のcDNAを発現ベクターにクローニングし,DEC1プロモータベクターと共に培養細胞に導入したところ,CLOCK, BMAL1, MyoD, HIF1などによってDEC1プロモータの発現誘導が認められた.さらに,これらにDEC1および関連因子であるDEC2発現ベクターを導入したところ,これらの一部の因子に対して,その発現誘導を押さえる働きが認められた.
次に,これらの因子が作用する領域を狭めていき,いくつかの因子がそこに結合することを明らかにし,それらの因子とDEC1,DEC2が相互作用することYeast Two Hybrid法によって確認した.

Research Products

• [Publications] Zelko I., Sueyoshi T., Kawamoto T., Moore R., Negishi M.: "The peptide near the C terminus regulates receptor CAR nuclear translocation induced by xenochemicals in mouse liver."Molecular and Cellular Biology. 21. 2838-2846 (2001)
• [Publications] Teramoto M., Nakamasu K., Noshiro M., Matsuda Y., Gotoh O., Shen M., Tsutsumi S., Kawamoto T., Iwamoto Y., Kato Y.: "Gene structure and chromosomal location of a human bHLH transcriptional factor DEC1-stra13-SHARP-2/BHLHB2."Journal of Biochemistry. 129. 391-396 (2001)
• [Publications] Yoshida E., Noshiro M., Kawamoto T., Tsutsumi S., Kuruta Y., Kato Y.: "Direct inhibition of lndian hedgehog expresson by parathyroid hormone (PTH)/PTH-related peptide and up-regulation by retinoic acid in growth plate chondrocytecultures."Experimental Cell Research. 265. 64-72 (2001)
• [Publications] Nakamasu K..Kawamoto T., Yoshida E., Noshiro M., Matsuda Y., Kato Y.: "Structure and promoter analysis of the mouse membrane-bound transferrin-like protein (MTf) gene."European Journal of Biochemistry. 268. 1468-1476 (2001)
• [Publications] Shen M., Kawamoto T., Teramoto M., Makihira S., Fujimoto K., Yan W., Noshiro M., Kato Y.: "lnduction of basic helix-loop-helix protein DEC1 (BHLHB2)/Stra13/Sharp2 in response to the cyclic adenosine monophosphate pathway."European Journal of Cell Biology. 80. 329-334 (2001)
• [Publications] Koyano Y., Kawamoto T., Kikuchi A., Shen M., Kuruta Y., Tsutsumi S., Fujimoto K., Noshiro M., Fujii K., Kato Y.: "Chondrocyte-derived ezrin-like domain containing protein (CDEP), a Rho guanine nucleotide exchange factor, is inducible in chondrocytes by parathyroid hormone and cyclic AMP and has transtoming activity in NIH3T3 Cells."Osteoarthritis and Chartilage. 9,Supplement A. S64-S68 (2001)