Nrf2遺伝子ノックアウトマウスを用いた口腔病変のストレス応答の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671924
• Research Institution: University of Tsukuba
• Principal Investigator: 柳川 徹 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10312852)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 石井 哲郎 筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (20111370)
• Keywords: Nrf2 / 鉄イオン / フェリチン / 酸化ストレス / BHA

Research Abstract

本研究は口腔病患に転写因子Nrf2がどのようにかかわっているのか解析をおこない明らかにするのが目的である。
そのため、本年度は、基礎的実験として、まずNrf2の制御している遺伝子群について調べた。イムノブロットにより、hemeoxygenase、peroxireoxin MSP23、A170などの酸化ストレスタンパク質がNrf2遺伝子ノックアウトマウスでは応答しないことから、Nrf2は一連の酸化ストレス群を制御していることがわかった。また、Nrf2遺伝子ノックアウトマウスのフェノタイプが歯の色調の変化であることを発見した。この色調の変化と制御しているタンパク質の関連から鉄イオンに着目し、Nrf2が上流にあると予想されているフェリチン遺伝子Fer-1に目を付け、Nrf2を強制発現した細胞中にPCRで増幅したFer-1の上流をつけたコンストラクトを製作し、ルシフェラーゼアッセイを用いてレポーターアッセイをおこない、AREが作用することを確認した。一方、個体からのアプローチとして、酸化ストレスをおよぼすbutylated hydroxyanisole (BHA)をマウスに対して経口投与を行い、生体内でのperoxireoxin MSP23の応答をみたところ、Nrf2遺伝子ノックアウトマウスでは応答がないこともわかった。
以上から、Nrf2が酸化ストレス応答に関与していることがわかり、次年度からの口腔病変の解析の基礎とする。

Research Products

• [Publications] Tetsuro Ishii: "Induction of murine intestinal and hepatic peroxiredoxin MSP23 by dietary butylated hydroxyanisole"Carcinogenesis. 21(5). 1013-1016 (2000)
• [Publications] Tetsuro Ishii: "Transcription Factor Nrf2 Coordinately Regulates a Group of Oxidative Stress-inducible Genes in Macrophages"Journal of Biological Chemistry. 275(21). 16023-16029 (2000)