口腔癌におけるメチル化による転位関連・細胞接着因子遺伝子発現の解析:カドヘリン、カテニン、インテグリン、APC遺伝子の構造異常と発現頻度

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671967
• Research Institution: Tokyo Dental College
• Principal Investigator: 武田 栄三 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (20322472)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 丹沢 秀樹 千葉大学, 医学部, 教授 (50236775) ; 柴原 孝彦 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (50178919)
• Keywords: 口腔癌 / メチル化 / 転移 / 細胞接着因子 / カドヘリン / カラニン / インテグリン / APC遺伝子

Research Abstract

前年度検索を行った42症例に加え、さらに37症例分の口腔扁平上皮癌組織、および、精製DNA、RNAについて、以下の実験を行った。
1)免疫染色(ABC染色)により、カドヘリン、カテニン、インテグリン、APC遺伝子タンパクの発現状態を調べた。
2)PCR-SSCP法、sequence法を用いて、カドヘリン、カテニン、インテグリン、APC遺伝子の構造異常の存在を検索した。
3)カドヘリン、APC遺伝子のプロモーター領域のmethylationによる発現減弱について、MSP法を用いて検索を行った。
4)脱メチル化剤を口腔癌由来細胞株に投与し、同サンプルから、RNAを抽出してRT-PCR法で、それぞれの遺伝子の発現状態を調べた。
以上の実験により、以下の結果を得た。
1)DNAの構造異常は、カドヘリンとカテニンでは同定できなかった。また、インテグリンでは2.7%、APC遺伝子では5.4%とDNAの構造異常は低値であった。
2)タンパクの発現異常は、発現減弱がAPC遺伝子で確認され、その割合は、22%に認められた。
3)DNAのmethylationはカドヘリンについては %、APC遺伝子については47%に認められ、両遺伝子の発現はmethylationにより制御されていることが示唆された。
4)脱メチル化剤の投与により、欠失あるいは減弱していた細胞株mRNAの再発現が確認された。
以上の結果をまとめ、現在論文投稿準備中である。
また、脱メチル化剤による抗癌作用についての実験は、今後さらに検討を加えていく予定である。