2002 Fiscal Year Annual Research Report
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12672060
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
浅田 善久 北里大学, 薬学部, 助教授 (90118779)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉川 孝文 北里大学, 薬学部, 教授 (80050540)
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| Keywords | forskolin / biosynthesis / non-mevalonate pathway / Coleus forskohlii / hairy root / diterpene / mevalonate pathway / betulinic acid |
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| Research Abstract |
既に、[1-^<13>C] glucoseの投与実験より、Coleus forskohliiのジテルペンは非メバロン酸経路によって生合成されることを明らかにした。今回は、C.forskohlii毛状根において非メバロン酸経路以外にメバロン酸経路が働いていることを明らかにするために、まず初めにC.forskohlii毛状根を大量に培養し、ジテルペン以外の成分として、2種のトリテルペン(betulinic acidおよび3-epi-maslinic acid)を単離した。次に[1-^<13>C] glucoseの投与実験より、betulinic acidを単離し、[1-^<13>C] glucoseの取り込みパターンを解析した結果、betulinic acidがメバロン酸経路で生合成されることを確認した。この事から、C. forskohlii毛状根においてメバロン酸経路および非メバロン酸経路の両経路が働いていることが明らかになった。
さらに、geranyl geranyl pyrophosphateからforskolin基本骨格であるmanoyl oxideへの閉環に関与するジテルペン閉環酵素のクローニングを試みた。Manoyl oxideは、通常のpimaradieneと違って、GGPPは二環性中間体生成後、H_2Oが付加し、さらに環化して三環性の中間体を経由して生成すると考えられる。そこで、既にクローニングされているent-kaureneの生合成に関与する酵素(copalyl diphosphate synthaseおよびent-kaurene synthase)のアミノ酸配列から縮重プライマーを作成し、RT-PCRを行った。その結果、3種のPCR産物が認められたが、CPSおよびKSとの相同性を有するクローンは確認出来なかった。現在のところ、CPSおよびKSとの相同性を有するクローンは得られていないが、RT-PCRのアニーリング温度等の条件を変えることによって全く異なるバンドが得られており、さらに条件検討をする必要があると考えられる。
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