2000 Fiscal Year Annual Research Report

サイログロブリン遺伝子異常による小胞体貯蔵病の病因解析と細胞内蛋白輸送機構の解明

Research Project

Project/Area Number	12672248
Research Institution	Dokkyo Medical University
Principal Investigator	菱沼昭獨協医科大学, 医学部, 助教授 (40201727)
Keywords	サイログロブリン / 遺伝子異常症 / 先天性甲状腺機能低下症 / ミスセンス変異 / 細胞内輸送 / 小胞体貯蔵病 / rdwラット / マクロアレイ法
Research Abstract	我々は、細胞内輸送障害の原因となるサイログロブリン(Tg)遺伝子異常症として、C1263Rミスセンス変異を4例4家系、C1995Sミスセンス変異を4例2家系に同定し、先天性甲状腺機能低下症動物モデルとしてrdwラットにG2320Rのミスセンス変異を見い出した。以上の結果をもとに、(1)変異Tg蛋白を培養細胞に発現させることにより、細胞内輸送障害を再構築し、その病態解析をすることとした。まず、正常および変異を有するヒトTgcDNA発現ベクターをG401腎細胞株に導入し、G418選択培地中、限外希釈法にてクローニングしTg発現腎細胞株を樹立した。正常Tgを導入した細胞株よりは培養液中にTgが分泌されたが、C1995S変異Tgを導入した細胞株はTgを分泌しなかった。しかし、細胞内Tg蛋白量は正常、C1995S変異Tg発現細胞株ともに全細胞蛋白量の2-3%と同等であり、変異Tgのみが細胞内に蓄積しているわけではなかった。これは、変異Tgが細胞内で効率的にプロテアゾーム等にて分解されている可能性があり、その機構の解明と、次の課題として小胞体貯蔵病を解析するために、変異Tgを細胞内に蓄積させることが必要である。(2)次に、変異Tg蛋白蓄積による遺伝子発現状況をプロファイリングするため、変異Tg発現ヒト甲状腺組織に発現増加する遺伝子群をマクロアレイ法で解析することとした。正常および変異Tgを有するヒト甲状腺組織よりmRNAを抽出し、両者に発現するmRNAをハイブリダイゼーションにて除いた後、変異Tg組織に多く発現しているmRNAをRT-PCR法にて増幅し、クローニングした。スクリーニングした1480クローンのうち57%、846クローンにインサートを認めた。現在、この846クローンをメンブランに固定し、2種類の異なる蛍光色素で、それぞれ正常、変異Tg組織mRNAを標識し、発現量の差を検討予定である。最終的には、発現量の差を認めたクローンをシークエンスし、その遺伝子群を同定する予定である。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Akira Hishinuma: "A novel missense mutation (G2320R) of the thyroglobulin gene causes hereditary hypothyroidism of the rdw rat."Endocrinology. 141(11). 4050-4055 (2000)
[Publications] Takeo Kuribayashi: "Sequence analysis of thyroid transcription factor-2 (TTF-2) gene in ten patients with congenital hypothyroidism due to thyroid dysgenesis."Clin.Pediatr.Endocrinol.. 9. 37-40 (2000)
[Publications] Kikuo Kasai: "15-deoxy-Δ^<1,2,14>-prostaglandin J_2 facilitates thyroglobulin production by cultured human thyrocytes."Am.J.Physiol.Cell Physiol.. 279. C1859-1869 (2000)
[Publications] 菱沼昭: "技術解説:医療に貢献している分子生物学の進歩その6 クレチン症の遺伝子診断"日本マス・スクリーニング学会誌. 10(1). 75-80 (2000)
[Publications] 菱沼昭: "特集甲状腺学の最近の進歩サイログロブリン遺伝子の異常"内分泌・糖尿病科. 11(1). 9-16 (2000)
[Publications] 栗林武男: "甲状腺の形成異常による先天性甲状腺機能低下症患者のthyroid-transcription factor-2(TTF-2)遺伝子解析"ホルモンと臨床特集内分泌興味ある症例. 第36集. 1-4 (2000)
[Publications] 柴山啓子: "Thyroid Transcription Factor-2遺伝子異常を認めた先天性甲状腺腫の1例"ホルモンと臨床特集内分泌興味ある症例. 第37集. 83-86 (2000)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

サイログロブリン遺伝子異常による小胞体貯蔵病の病因解析と細胞内蛋白輸送機構の解明

Principal Investigator

菱沼 昭 獨協医科大学, 医学部, 助教授 (40201727)

Research Products

[Publications] Akira Hishinuma: "A novel missense mutation (G2320R) of the thyroglobulin gene causes hereditary hypothyroidism of the rdw rat."Endocrinology. 141(11). 4050-4055 (2000)

[Publications] Takeo Kuribayashi: "Sequence analysis of thyroid transcription factor-2 (TTF-2) gene in ten patients with congenital hypothyroidism due to thyroid dysgenesis."Clin.Pediatr.Endocrinol.. 9. 37-40 (2000)

[Publications] Kikuo Kasai: "15-deoxy-Δ^<1,2,14>-prostaglandin J_2 facilitates thyroglobulin production by cultured human thyrocytes."Am.J.Physiol.Cell Physiol.. 279. C1859-1869 (2000)

[Publications] 菱沼昭: "技術解説:医療に貢献している分子生物学の進歩 その6 クレチン症の遺伝子診断"日本マス・スクリーニング学会誌. 10(1). 75-80 (2000)

[Publications] 菱沼昭: "特集 甲状腺学の最近の進歩 サイログロブリン遺伝子の異常"内分泌・糖尿病科. 11(1). 9-16 (2000)

[Publications] 栗林武男: "甲状腺の形成異常による先天性甲状腺機能低下症患者のthyroid-transcription factor-2(TTF-2)遺伝子解析"ホルモンと臨床 特集 内分泌興味ある症例. 第36集. 1-4 (2000)

[Publications] 柴山啓子: "Thyroid Transcription Factor-2遺伝子異常を認めた先天性甲状腺腫の1例"ホルモンと臨床 特集 内分泌興味ある症例. 第37集. 83-86 (2000)

菱沼昭獨協医科大学, 医学部, 助教授 (40201727)

[Publications] 菱沼昭: "技術解説:医療に貢献している分子生物学の進歩その6 クレチン症の遺伝子診断"日本マス・スクリーニング学会誌. 10(1). 75-80 (2000)

[Publications] 菱沼昭: "特集甲状腺学の最近の進歩サイログロブリン遺伝子の異常"内分泌・糖尿病科. 11(1). 9-16 (2000)

[Publications] 栗林武男: "甲状腺の形成異常による先天性甲状腺機能低下症患者のthyroid-transcription factor-2(TTF-2)遺伝子解析"ホルモンと臨床特集内分泌興味ある症例. 第36集. 1-4 (2000)

[Publications] 柴山啓子: "Thyroid Transcription Factor-2遺伝子異常を認めた先天性甲状腺腫の1例"ホルモンと臨床特集内分泌興味ある症例. 第37集. 83-86 (2000)