2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12680812
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
西川 彰男 島根大学, 生物資源科学部, 助教授 (30192686)
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| Keywords | 初代培養 / 継代培養 / アフリカツメガエル / 心臓細胞 / 増殖曲線 / クローン増殖 / 筋芽細胞 |
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| Research Abstract |
1.薬剤選別とクローン化が可能なぐらい良く増える細胞種を見つけるため、成体カエルの肝臓、精巣、卵巣、動脈、骨格筋、心臓のそれぞれから初代培養および、継代培養を行った。組織をコラーゲナーゼとトリプシンで消化したのち、細胞を分散させ、血清を含む培溶液中で培養した。その結果、肝臓、精巣、卵巣、大動脈ではさほど顕著な増殖はみられなかったが、心臓からの培養では顕著な増殖がみられた。Population doubling timeで50回ぐらいまでの分裂が可能であった。培養初期の増殖さかんなころには1週間のあいだに10倍の細胞数の増加が観察された。しかし1/10の希釈で継代を10回繰り返すころには増殖の速度は半分以下に遅くなり、また培養ウエル中での最大細胞数も減少した。細胞の形態もおおきく広がったようなかたちへと変化した。これらのことはカエル心臓細胞における'ヘイフリックの限界'の存在を示すと考えらる。つまりこの細胞は正常細胞の範囲に止まっており、癌化の兆しが現われていないことが示唆された。
2.上記の心臓細胞は-80℃にて冷凍保存可能であった。
3.上記の心臓細胞を用いて、クローン培養を試みた。限界希釈法、少数播種法をおこなっているが、今のところ、クローン増殖の条件は見つかっていない。薬剤に対する抵抗性によって選別したあと、1個の細胞からクローナルに細胞を増やすにはECM成分をクローン初期に補給するか、またはConditioned mediumの添加などの工夫が必要と予想された。
4.成体足および幼生の尾由来の細胞の増殖性も調べ、クローン化を試みた。16mmウエルあたり110細胞まくと筋分化コロニーが観察された。それ以下の播種数だと分化コロニーはみられなかった。
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Research Products
(1 results)
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[Publications] Shibota,Yoko: "Larval-to-adult conversion of a myogenic system in the frog, Xenopus laevis by larval-type myoblasts-specific control of cell division, cell differentiation and programmed cell death by T_3."Differentiation. 66. 227-238 (2000)
