2001 Fiscal Year Annual Research Report

日本で分離されたLCMウイルスの知見を基にした組換え抗原の作製と診断法への応用

Research Project

Project/Area Number	12680815
Research Institution	Nagasaki University
Principal Investigator	大沢一貴長崎大学, 医学部, 助手 (90244756)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	近藤宇史長崎大学, 医学部, 教授 (00158908) 片峰茂長崎大学, 医学系研究科, 教授 (40161062) 佐藤浩長崎大学, 医学部, 教授 (50072947)
Keywords	LCMV / リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス / 診断用組換え抗原
Research Abstract	国内でもある港湾地区のマウスからリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)が分離され(OQ株)、プロトタイプであるWE株と遺伝子レベルでの比較検討がS遺伝子領域について行われてきた。OQ28株の塩基配列は、他の国内分離OQ株とは99%以上一致し、WE株と国内分離株とは大別されることが明らかとなった。そこで、日本国内においてLCMウイルスに感染したか否かを高感度、かつ特異的に診断するためには、国内分離株を用いた診断用抗原の作製の必要性が不可欠であると考え、国内分離株OQ28株を用いてタンパク発現を目指することとした。 1.発現用ベクター(pDsRed)に置換し、COS7細胞にトランスフォームした。OQ株のGp-2、Np-full、Np-Nend、Np-center Np-Cendが発現ベクターに置換された。トランスフォームの結果、Np-full、Np-Nend、Np-centerで赤色の蛍光を発する細胞を得た。ただし、診断に耐えるだけの抗原量が得られるか疑問が残った。 2.Np領域は、糖鎖で修飾されないので、大腸菌で発現させても抗原性を発揮する可能性が高いと考えられる。しかしながら、Npの名前の由来のとおり核酸に結合する性質が強く、大腸菌にとって毒性のあるタンパクであれば発現不可能であろうという懸念があった。そこで、細胞そのものではなく菌体成分のみを用いる発現を試みることにした発現用ベクター(pIVEX2.3、PIVEX2.4b)に置換し、そのシーケンスを行ってOQ28株のNp-full、Np-Cendの領域が両ベクターに導入されていることを確認できた。現在、タンパク発現の成否、およびその診断用抗原としての有用性について検討している。この間、大腸菌および哺乳類細胞における発現ベクターの構築を、おもにLCMV国内分離株を用いて行い、興味深い成果を得た。今後は、多数の検体を用いた抗原の有用性の検討を加え、抗原の開発・普及を推進していく予定である。

Research Products

(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Ohsawa: "Sequence and Genetic Arrangement of the Us Region of the Monkey B Virus(Cercopithecine Herpesvirus 1)Genome and Comparison with the Us Regions of Other Primate Herpesviruses."Journal of Virology. 76・3. 1516-1520 (2002)
[Publications] Watanabe: "Isolation of a Parainfluenza Virus Type 3-like Agent from Guinea Pigs."Acta Med.Nagaskienaha. 46・3-4. 15-18 (2001)
[Publications] Ogawa: "Superoxide Dismutase in Senescence-accelerated Mouse Retina"The Histochemical Journal. 33. 43-50 (2001)
[Publications] Yamamoto: "Microbiological Contamination in Genetically Modified Animals and Proposals for a Microbiological Test Standard for National Universities in Japan."Exp.Animals. 50・5. 397-407 (2001)
[Publications] 前島一叔: "実験動物感染病の対応マニュアル"アドスリー. 345 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

日本で分離されたLCMウイルスの知見を基にした組換え抗原の作製と診断法への応用

Principal Investigator

大沢 一貴 長崎大学, 医学部, 助手 (90244756)

Research Products

[Publications] Ohsawa: "Sequence and Genetic Arrangement of the Us Region of the Monkey B Virus(Cercopithecine Herpesvirus 1)Genome and Comparison with the Us Regions of Other Primate Herpesviruses."Journal of Virology. 76・3. 1516-1520 (2002)

[Publications] Watanabe: "Isolation of a Parainfluenza Virus Type 3-like Agent from Guinea Pigs."Acta Med.Nagaskienaha. 46・3-4. 15-18 (2001)

[Publications] Ogawa: "Superoxide Dismutase in Senescence-accelerated Mouse Retina"The Histochemical Journal. 33. 43-50 (2001)

[Publications] Yamamoto: "Microbiological Contamination in Genetically Modified Animals and Proposals for a Microbiological Test Standard for National Universities in Japan."Exp.Animals. 50・5. 397-407 (2001)

[Publications] 前島一叔: "実験動物感染病の対応マニュアル"アドスリー. 345 (2001)

大沢一貴長崎大学, 医学部, 助手 (90244756)