多形性膠芽腫細胞におけるMMAC1/PTENの細胞内シグナル伝達経路の解明

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12770768
• Research Institution: Tokyo Medical University
• Principal Investigator: 佐野 哲郎 東京医科大学, 医学部, 助手 (20322464)
• Keywords: 多形性膠芽腫 / 癌抑制遺伝子 / 細胞内シグナル伝達

Research Abstract

癌抑制遺伝子MMAC1/PTENとprotein tyrosine kinaseに関与すると考えられる各種細胞内シグナル伝達因子との関係を明らかにするため、初年度の平成12年度はおもにウエスタンブロッティングを中心とした細胞内シグナル伝達経路の推定を行なうことを目標としていた。
しかし米国M.D.Anderson Cancer Center神経腫瘍学のPeter A.Steck教授の急逝に伴い研究室が閉鎖されたため、当初譲渡を受ける予定であったヒト多形性膠芽腫細胞株U-251にMMAC1/PTENを導入したU-251-MMACが入手困難となったため、課題研究の進行が大幅に遅延している。
そこでATCCより新たにヒト多形性膠芽腫細胞株U-251を入手し、独自にP.A.Steckらと同様の方法にてU-251-MMACを作成した。MMAC1/PTEN全長を含むplasmid vectorをリポフェクチン法によってU-251へ導入したU-251-MMACを6クローン得ることが出来た。現在、これをSanta-Cruz社製PTEN(N-19)抗体を用いてウエスタンブロッティング法とchamber slideによる免疫染色法でcharacterization中である。ウエスタンブロッティング法ではややバックグランドが高く、免疫染色ではいずれのクローンでも細胞膜近傍が染色されるが、核は染色されない。これは、おもに核が染色されるという以前我々が報告した(Cancer Research,59(8),1820-1824,1999)結果と異なるものであり、この点についても今後検討したい。