網膜移植した神経幹細胞の増殖・分化に影響を与える眼内因子についての研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12771035
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 福島 美紀子 熊本大学, 附属病院・眼科, 助手 (10284770)
• Keywords: 網膜移植 / 神経幹細胞 / 網膜神経幹細胞 / 増殖因子 / 神経分化

Research Abstract

1)Ephサブクラス受容体型チロシンキナーゼ、そのリガンドのニワトリ網膜発生過程における発現パターンの解析
Ephサブクラス受容体型チロシンキナーゼに属する5つの分子(Chick embryonic kinase (Cek4,Cek5,Cek7,Cek8,Cek9)について、ジゴキシゲニン標識RNAプローブを用いたin situ hybridization法により組織学的解析を行い、発生過程のニワトリ網膜において特徴的な発現パターンが示されることを報告した。さらにこれらのリガンドの発現パターンを、ニワトリ胚網膜およびその投射系である視蓋において、in situ hybridization法により調べ、その特徴的な発現パターンが示された。
2)ラット網膜におけるの発現パターンの解析
その発現より網膜の神経発生分化に重要な役割を果たしていると考えられるEphサブクラス受容体型チロシンキナーゼについて哺乳動物で移植実験に用いられているラットでの発現を調べるため、幼若ラット脳組織よりmRNAを抽出しRT-PCR法を行い、サブクローニング、前述のEphサブクラス受容体型チロシンキナーゼ分子のラットホモローグ(EphA3,4)を単離した。in situ hybridization法により、発生過程におけるその特徴的な発現パターンが示された。
3)神経前駆細胞の培養
GFP脳海馬組織由来神経前駆細胞(PZ5)の供与を受け、この継代培養法を確立中である。さらに、毛様体色素上皮から得られる網膜幹細胞についても解析を行なっている。この神経前駆細胞を既知の増殖因子とともにラット眼内へ移植し、網膜内における分化増殖機構を既知のマーカーを用いて観察中である。さらに実験数を増やし最適な移植条件を確立したのち、Eph分子の発現を解析する予定である。