角膜上皮細胞におけるラクトフェリンレセプターと酸化ストレス

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12771051
• Research Institution: Tokyo Dental College
• Principal Investigator: 榛村 重人 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (00235780)
• Keywords: 角膜上皮細胞 / アポトーシス / 紫外線 / カスパーゼ / ネクローシス / 抗酸化物質 / 酸化ストレス / ミトコンドリア

Research Abstract

培養角膜上皮細胞に対する酸化ストレスと、細胞死の関連を追求するため、紫外線照射による細胞死の形態を調べた。角膜上皮細胞株(HCEC)を15%血清SHEM培地で培養し、紫外線を50mJ(以下低照射群)と450mJ(以下強照射群)照射した。6時間培養し、細胞形態を観察した。アポトーシスの関与を調べるために、蛍光基質を用いてカスパーゼ3と9の活性を蛍光プレートリーダーで測定した。カスペースの活性化に関与するミトコンドリアの機能を、Rhodamine 123の蛍光強度で評価した。
低照射群では約6時間で細胞は培養ディッシュより剥がれ、カスペース3と9の活性が経時的に上昇した。一方、強照射群では細胞脱落は見られず、カスペース9と3の活性の上昇は見られなかった。ミトコンドリア内膜の電位勾配と比例するRhodamine 123の蛍光強度は、両群において低下したが、強照射群では不可逆的だった。
今回の結果より、紫外線は角膜上皮細胞において、ミトコンドリア障害を介してカスペース酵素群を活性化し、アポトーシスを起こすことがわかった。しかし、一定の線量を超える紫外線では、主にネクローシスが起きることが示唆された。

Research Products

• [Publications] S.Shimmura: "Telomerase activity and p53 expression in pterygia"Invest Ophthalmol Vis Sci. 41. 1364-1369 (2000)
• [Publications] S.Shimmura: "Acidic electrolysed water in the disinfection of the ocular surface"Exp Eye Res. 70. 1-6 (2000)