2001 Fiscal Year Annual Research Report
ニワトリDT40細胞を用いた非相同組換え機構の遺伝的解析
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12771409
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
足立 典隆 横浜市立大学, 木原生物学研究所, 助手 (30264675)
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| Keywords | 非相同組換え / DT40 / ジーンターゲティング / エンドジョイニング / DNAライゲース / Ku / FEN-1 / DNAトポイソメラーゼ |
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| Research Abstract |
ニワトリBリンパ細胞株DT40を用いて,非相同組換えへの関与が示唆される遺伝子の破壊株(ホモ変異株)をジーンターゲティング法により作製し,解析を行った.
1.DNA ligase IV : DNA ligase IV遺伝子破壊株およびKu70遺伝子との二重破壊株の解析を引き続き行った.DNA ligase IVが,Kuに依存した非相同組換え(エンドジョイニング)の過程に必須の役割を果たしていることを明らかにした.また,これらの破壊株におけるランダムインテグレーションおよびジーンターゲティングの頻度を詳しく調べた.
2.DNA ligase III:ヘテロ変異株を取得し、解析を行った.また,ホモ変異株の取得を試みるとともに,DNA ligaseIIIが細胞増殖に必須である可能性を考慮し,条件致死変異株作製を試みた.
3.FEN-1:ホモ変異株を取得し,解析を行った.FEN-1はDNA複製に必須ではないが,塩基除去修復に必須であることを明らかにした.また,組換え,特にランダムインテグレーションにおけるFEN-1の役割についても調べた.さらに,DNAポリメラーゼβとの二重破壊株を作製するため,DNAポリメラーゼβ遺伝子をクローニング,導入ベクターを作製して破壊株の分離を試みた.
4.DNAトポイソメラーゼ(トポ)IIα:ヘテロ変異株の解析を引き続き行った.マウスES細胞での結果と同様,ヘテロ変異株の増殖速度は野生株と変わらなかったが,VP-16やICRF-193等のトポII阻害剤に対する感受性が低下していた.また,組換え,特にランダムインテグレーションにおけるトポIIαの役割についても調べた.
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Adachi, N.: "DNA ligaseIV-deficient cells are more resistant to ionizing radiation in the absence of Ku70 : Implications for DNA double-strand break repair"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98. 12109-12113 (2001)
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[Publications] Kobayashi, M.: "Decreased expression DNA topoisomerase IIα expression confers increased resistance to ICRF-193 as well as VP-16 in mouse embryonic stem cell mutants"Cancer Lett.. 166. 71-77 (2001)
