環状オリゴ糖/デンドリマー結合体を基本骨格とする高機能性遺伝子導入ベクターの構築

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12771464
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 有馬 英俊 熊本大学, 薬学部, 助手 (50260964)
• Keywords: シクロデキストリン / デンドリマー / ガラクトース / 共有結合体 / 遺伝子導入 / 非ウイルスベクター

Research Abstract

ガラクトシルα-シクロデキストリン(Gal-α-CyD)とGeneration 2のポリアミドアミンデンドリマー(デンドリマー)との結合体(Gal-α-CDE)およびα-シクロデキストリン(α-CyD)とガラクトシル化デンドリマーとの結合体(Gal-DE-α-CyD)を新規に調製するため、その合成法・精製法について検討した。また、これら結合体とプラスミドDNA(pDNA)との複合体形成、アシアロ糖蛋白レセプターを発現するヒト肝癌細胞HepG2細胞におけるレポーター遺伝子(ルシフェラーゼ)の発現効率をガラクトース非修飾デンドリマー/α-CyD結合体の場合と比較検討した。Gal-α-CDEは、Gal-α-CyDをトシル化後、DMSO中でデンドリマーと24時間反応させて合成した。一方、Gal-DE-α-CyDはデンドリマーと乳糖をバッファー(pH7.0)中で10日間反応させた後、トシル化α-CyDとDMSO中で24時間反応させて合成した。これら反応物はゲル濾過、アルコール沈殿、アフィニティークロマトグラフィーにより精製した。NMRスペクトルの結果より、結合体はα-CyDとデンドリマーがモル比1:1で結合していることを確認した。電気泳動法で検討した結果、これらα-CyD結合体とpDNAとの複合体形成能はデンドリマーと同様であった。Gal-α-CDE/pDNA複合体のHepG2細胞におけるレポーター遺伝子の発現は、デンドリマー/pDNA複合体と同程度であったが、Gal-DE-α-CyD/pDNA複合体では増大する傾向が観察された。デンドリマー中のGalの置換度を調節することにより、遺伝子導入効率の増大が示唆された。

Research Products

• [Publications] H.Arima: "Enhancement of Gene Expression by Polyamidoamine Dendrimer Conjugates with α-,β- and γ-Cyclodextrins"Bioconjugte Chemistry. (印刷中). (2001)
• [Publications] H.Arima: "Contribution of P-Glycoprotein to the Enhancing Effects of Dimethyl-β-cyclodextrin on Oral Bioavailability of Tacrolimus"Journal of Pharmacolgy and Experimental therapeutics. (印刷中). (2001)
• [Publications] H.Arima: "Design of potent Phosphorothioate Antisense Oligonucleotides Designed to Human Interleukin 10 Gene and Their Evaluation of Antisense Activity"Pharmaceutical Research. 16(8). 1163-1171 (1999)