2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12780511
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
加藤 龍一 大阪大学, 大学院・理学研究科, 助手 (50240833)
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| Keywords | DNA修復 / MutS蛋白質 / 高度好熱菌 / X線溶液散乱 / ミスマッチ修復 / ATP加水分解 / ヌクレオチド結合 / 構造変化 |
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| Research Abstract |
塩酸グアニジンによる変性実験とペプチダーゼを用いた限定分解実験から、MutS蛋白質は少なくとも3つの構造ドメインからなると推定された。そこで、それらの構造ドメインの機能を解析するために、それぞれに対応する3つの断片化遺伝子を作成し、それらの大量発現と精製を行った。得られた断片化蛋白質が立体構造を保っていることをCDを用いて確認後、それらの溶液中での分子量・ATP加水分解活性・DNA結合能等について検討した。その結果、中央部のドメインがMutS蛋白質の多量体形成能と2本鎖DNAへの非特異的な結合能を有していること、及び、C末端ドメインがATP加水分解活性とミスマッチ特異的DNA結合能を持つことが明らかになった。さらに、C末端ドメインの活性は単量体では現れず、2量体の時のみに現れるという興味深い性質を示した(Tachiki et al.,2000)。また、溶液中でのMutS蛋白質のコンフォメーションをX線小角散乱を用いて測定した。その結果、MutSはアデニンヌクレオチド非存在下・ADP存在下・ATP存在下で3つの異なる溶液構造を取っていることが明らかになった。ATP結合モチーフの変異蛋白質を新たに作成したところ、これではヌクレオチドによる構造変化が観察されなかったことから、MutSの機能にはヌクレオチドの結合に伴う構造変化が重要な役割を果たしていることを明らかになった(Kato et al,,in preparation)。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Tachiki et al.: "DNA-Binding and protein-protein interaction sites on mismatched DNA recognition protein, MutS from Thermus thermophilus HB8"J.Biol.Chem.. 275. 40703-40709 (2000)
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[Publications] Kato et al.: "Observation of RecA protein monomer by small angle X-ray scattering with synchrotron radiation"FEBS Lett.. 482. 159-162 (2000)
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[Publications] Sugahara et al.: "Crystal structure of MutM (Fpg) protein from an extreme thermophile, Thermus thermophilus HB8"EMBO J.. 19. 3857-3869 (2000)
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[Publications] Yamagata et al.: "Interaction of UvrA and UvrB proteins with a fluorescent single-stranded DNA : implication for slowconformational change upon interaction of UvrB with DNA"J.Biol.Chem.. 275. 13235-13242 (2000)
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[Publications] Spies et al.: "The RadA protein from a hyperthermophilic archaeon Pyrobaculum islandicum is a DNA-dependent ATPase that shows two disparate catalytic modes, with a transition temperature at 75C"Eur.J.Biochem.. 276. 1125-1137 (2000)
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[Publications] Sugahara et al.: "Crystallization and preliminary X-Ray crystallographic studies of Thermus thermophilus HB8 MutM protein involved in repair of oxidative DNA damage"J.Biochem.. 127. 9-11 (2000)
