2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12876019
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
熊谷 英彦 京都大学, 生命科学研究科, 教授 (70027192)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
玉置 尚徳 京都大学, 生命科学研究科, 助手 (20212045)
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| Keywords | スクリーニング / 酵母 / 受容体 / グルコース / 味覚 |
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| Research Abstract |
味覚は我々が豊かな食生活を享受するためになくてはならない感覚である。しかしながら味覚のうちで甘みの感知に関しては全く明らかにされていないのが現状である。申請者らは、出芽酵母において3量体Gタンパク質αサブユニットであるGPA2と相互作用する受容体をコードする遺伝子GPR1のクローニングに成功した。出芽酵母においては、代表的な栄養源であるグルコースに対する応答が細胞内cAMPレベルの上昇という形で現れる事が知られているが、GPR1遺伝子を破壊した株においては、グルコース添加後のcAMPの上昇が全く認められなかった。このことから、GPR1は、グルコースを認識して細胞内にシグナルを伝達するグルコース受容体であることが示された。
本研究においては、DNAチップを用いた包括的解析を行い、グルコース依存的に転写誘導される遺伝子のなかでGPR1を介して誘導が起こる遺伝子の検索を行った。すなわち、野生株およびGPR1遺伝子破壊株について、グルコースを炭素源とする培地で増殖させた細胞からRNAを調製し、逆転写酵素を用いてそれぞれ蛍光物質であるCy3,Cy5でラベルしたcDNAプールを作成した。各cDNAプールをプローブとしでDNAチップとのハイブリダイゼーションを行いグルコース添加によって特異的に転写活性化される遺伝子を検索した。。その結果、GPR1遺伝子破壊株においては、細胞増殖時のタンパク質合成に関与する一連の遺伝子群の転写減少が認められることが明らかになった。現在、これら遺伝子のなかからレポーター遺伝子をつなぐ候補を検索中である。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Hisanori Tamaki: "GPR1 regulrates filamentous growth through FLO11 in yeast Saccharomyces cerevisiae"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 164-168 (2000)
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[Publications] Katayama T,Suzuki H,Koyanagi T,Kumagai H.: "Cloning and random mutagenesis of the erwinia herbicola tyrR gene for high-level expression of tyrosine phenol-lyase"Appl Environ Microbiol.. 66. 4764-4771 (2000)
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[Publications] Inoue M,Hiratake J,Suzuki H,Kumagai H,Sakata K.: "idenilfication of caialytic nucleophile of Escherichia coli gamma-glutamyltranspeptidase by gamma-monofluorophosphono derivative of glutamic acid : N-terminal thr-391 in small subunit is the nucleophile."Biochemistry. 39. 7764-7771 (2000)
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[Publications] Ashida H,Yamamoto K,Kumagai H.: "Trypsin Inhibitory activity of bovine fetuin de-O-glycosylated by endo-a-N-acetylgalactosaminidase"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64. 2266-2268 (2000)
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[Publications] Ashida H,Tamaki H,Yamamoto,K Kumagai H.: "Molecular cloning of cDNA encoding a-N-acetylgalactosaminidase from Acremonium sp.and its expression in yeast"Arch.Biochem.. 384. 305-310 (2000)
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[Publications] Xiao M,Yamamoto K,Kumagai H.: "High-yield production and characterization of a-galactosidase from Bifidobacterium breve grown on raffinose"Biotechnology letters. 22. 747-751 (2000)
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[Publications] Hidehiko Kumagai: "Encyclopedia of Bioprocess Technology : Fermentation, Biocatalysis,and Bioseparation"John Wiley & Sons, Inc.. 8 (1999)
