2001 Fiscal Year Annual Research Report

変異ダイナミン遺伝子導入による赤芽球形態分化過程の検討

Research Project

Project/Area Number	12877002
Research Institution	山梨医科大学
Principal Investigator	大野伸一山梨医科大学, 医学部, 教授 (50109170)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	藤井靖久山梨医科大学, 医学部, 助手 (60126703) 馬場健山梨医科大学, 医学部, 助教授 (90208710)
Keywords	赤芽球分化過程 / ダイナミン / エンドサイトーシス / トランスフェリンリセプター / ディープエッチング法
Research Abstract	本研究の目的は、赤血球の脱核分化過程におけるエンドサイトーシスの関与を、変異ダイナミン遺伝子導入赤芽球系細胞を用いて検討することであった。平成12年度は、ヒト赤芽球系細胞培養法の確立と分化誘導条件について検討した。ヒト腰帯血から得られた細胞を、未成熟造血前駆細胞および幹細胞で特異的に発現するマーカーAC133に対する特異抗体で精製した。AC133陽性細胞を赤芽球系への分化誘導後、光顕用ギムザ染色、トランスフェリンリセプターの免疫組織化学的染色、およびエポン包埋材料の電顕的観察により検討した。その結果、分化誘導3日目より典型的な正染性赤芽球が出現し、以後その割合は増加していった。脱核幼若赤血球は分化誘導5日目より認められるようになった。トランスフェリンリセプター陽性細胞も3日目より出現し、次第に増加した。次に、分化誘導3日目の細胞を用いて、変異ダイナミン遺伝子の導入を試みた。アデノウイルスベクター法では効率が悪いことが判明したため、代わりにトランスフェリンフェクション法を用いた。平成12年度の本研究により、赤芽球系細胞に変異遺伝子の導入が可能となったので、平成13年度は野生型、および変異ダイナミン遺伝子導入した赤芽球細胞を経時的に培養し、以下の検討を行った。(1)4%パラホルムアルデヒドで固定し、サポニン処理後、抗ダイナミン抗体、抗HAtag抗体、抗クラスリン抗体を用い、共焦点レーザー顕微鏡で観察した。(2)細胞膜剥離観察法により、各細胞の上部細胞膜を剥離回収し、レプリカ膜を作製した。一部の試料は抗ダイナミン抗体とコロイド金標識二次抗体を用いた免疫金染色を加えた。(3)赤芽球細胞を急速凍結し、凍結割断を行い、レプリカ膜を作製した。以上の結果より赤芽球分化過程に伴う両側陥凹円盤状赤血球形態形成とトランスフェリン取込みエンドサイトーシスが関連性を有することが明かとなった。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] 大野伸一: "生体内凍結技法"学際企画、電子顕微鏡基礎技術と応用2000〜凍結技法で広がる超微の世界〜. 157-174 (2000)
[Publications] 大野伸一: "Determination of three-dimensional distribution of apoptotic DNA damage by combination of TUNEL and quick-freezing and deepetching techniques"Humana Press, In situ detection of DNA damage ; Methods Mol. Biol. (in press). (2001)
[Publications] 薛梅: "Morphological study of erythrocyte shapes in red pulp of mouse spleens revealed by an in vivo cryotechnique"Histology and Histopathology. 16. 123-129 (2001)
[Publications] 薛梅: "電顕レプリカ免疫染色法によるマウス幼若赤血球膜骨格構造の超微形態学的研究"解剖学雑誌. 76巻・1号. 135 (2001)
[Publications] 薛梅: "Morphological study of flowing erythrocytes in large blood vessels and splenic red pulp of mice revealed by in vivo cryotechnique"日本電子顕微鏡学会関東支部第25回講演会. 78 (2001)
[Publications] 藤井靖久: "種々流出圧力下におけるヒト流動赤血球内元素組成のX線微小分析"日本電子顕微鏡学会関東支部第25回講演会. 77 (2001)
[Publications] 大野伸一: "病気の形態学(分担:形態異常赤血球の膜骨格構造)"学際企画(日本臨床電顕学会編). 200 (2002)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

変異ダイナミン遺伝子導入による赤芽球形態分化過程の検討

Principal Investigator

大野 伸一 山梨医科大学, 医学部, 教授 (50109170)

Research Products

[Publications] 大野 伸一: "生体内凍結技法"学際企画、電子顕微鏡基礎技術と応用2000〜凍結技法で広がる超微の世界〜. 157-174 (2000)

[Publications] 大野 伸一: "Determination of three-dimensional distribution of apoptotic DNA damage by combination of TUNEL and quick-freezing and deepetching techniques"Humana Press, In situ detection of DNA damage ; Methods Mol. Biol. (in press). (2001)

[Publications] 薛 梅: "Morphological study of erythrocyte shapes in red pulp of mouse spleens revealed by an in vivo cryotechnique"Histology and Histopathology. 16. 123-129 (2001)

[Publications] 薛 梅: "電顕レプリカ免疫染色法によるマウス幼若赤血球膜骨格構造の超微形態学的研究"解剖学雑誌. 76巻・1号. 135 (2001)

[Publications] 薛 梅: "Morphological study of flowing erythrocytes in large blood vessels and splenic red pulp of mice revealed by in vivo cryotechnique"日本電子顕微鏡学会関東支部第25回講演会. 78 (2001)

[Publications] 藤井 靖久: "種々流出圧力下におけるヒト流動赤血球内元素組成のX線微小分析"日本電子顕微鏡学会関東支部第25回講演会. 77 (2001)

[Publications] 大野 伸一: "病気の形態学(分担:形態異常赤血球の膜骨格構造)"学際企画(日本臨床電顕学会編). 200 (2002)

大野伸一山梨医科大学, 医学部, 教授 (50109170)

[Publications] 大野伸一: "生体内凍結技法"学際企画、電子顕微鏡基礎技術と応用2000〜凍結技法で広がる超微の世界〜. 157-174 (2000)

[Publications] 大野伸一: "Determination of three-dimensional distribution of apoptotic DNA damage by combination of TUNEL and quick-freezing and deepetching techniques"Humana Press, In situ detection of DNA damage ; Methods Mol. Biol. (in press). (2001)

[Publications] 薛梅: "Morphological study of erythrocyte shapes in red pulp of mouse spleens revealed by an in vivo cryotechnique"Histology and Histopathology. 16. 123-129 (2001)

[Publications] 薛梅: "電顕レプリカ免疫染色法によるマウス幼若赤血球膜骨格構造の超微形態学的研究"解剖学雑誌. 76巻・1号. 135 (2001)

[Publications] 薛梅: "Morphological study of flowing erythrocytes in large blood vessels and splenic red pulp of mice revealed by in vivo cryotechnique"日本電子顕微鏡学会関東支部第25回講演会. 78 (2001)

[Publications] 藤井靖久: "種々流出圧力下におけるヒト流動赤血球内元素組成のX線微小分析"日本電子顕微鏡学会関東支部第25回講演会. 77 (2001)

[Publications] 大野伸一: "病気の形態学(分担:形態異常赤血球の膜骨格構造)"学際企画(日本臨床電顕学会編). 200 (2002)