2000 Fiscal Year Annual Research Report

神経細胞でサイクリックADPリボースは真のセカンドメッセンジャーか

Research Project

Project/Area Number	12877007
Research Institution	Kanazawa University
Principal Investigator	東田陽博金沢大学, 医学部, 教授 (30093066)
Keywords	Caプール / サイクリックADPリボース / 神経細胞 / セカンドメッセンジャー / モジュレーター / リアノジン受容体
Research Abstract	サイクリックADPリボース(cADPR)が細胞内Caプールであるリアノジン受容体に作用する、セカンドメッセンジャーないしは、Caのモジュレーターとされて久しいが、神経細胞をはじめ種々の横紋筋や平滑筋組織で作用が一定しないところがあり、その役割がいまひとつあきらかではない。その最大の理由はリアノジン受容体サブタイプの分布であるが、それに加えて、すでに存在するcADPRに影響されて不一致を生じるものと思われる。そこで神経や心臓組織におけるcADPRが真にセカンドメッセンジャーであることを証明するためには、生細胞ではなく、膜分画でcADPRの合成過程が受容体刺激によりコントロールされていることを実証すればよいと考た。今年度は、メタボトロピックなグルタミン酸受容体(mGluR)とcADPR産成酵素とのカップリングを測定することにより解明することにした。 1.mRluRのプラスミドDNAないしcDNAを京都大学大学院医学研究科・中西重忠教授より分与してもらった。2.mGluR1〜7を制限酵素で切り出し、哺乳動物細胞発現ベクターpcDNA3に組み込んだ。3.NG108-15ニューロブラストーマXグリオーマ雑種神経様神経腫瘍細胞を培養した。4.DNAとリポフェクタミンをNG108-15細胞に添加し、DNAを導入した。5.数日増殖させ培養し、異なるmGluRを発現する細胞を集めた。6.粗膜分画を得、それを酵素源とし、[^3H]NADを含む液とグルタンミン酸存在、非存在下反応し、2分後過塩素酸を添加し反応を止めた。7.薄層クロマトグラフィーにて、産物の[^3H]cADPRを分離し8.放射活性を測定した。9.mGluとm5サブタイプ以外にm3、mGluR1とmGluR5サブタイプ、mGluR3、mGluR6がADPリボシールシクラーゼ活性を上昇させることがわかった。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Higashida,H.,Yokoyama,S.,Hashii,M. et al.: "Signal transduction from bradykinin, angiotensin, adrenergic and muscarinic receptors to effector enzymes, including ADP-ribosyl cyclase."Biological Chem.. 382. (2001)
[Publications] Higashida,H.,Hashii,M.,Yokoyama,S. et al.: "Cyclic ADP-ribose as a potential second messenger for neuronal Ca2+ signaling."J.Neurochem.. 76. 321-331 (2000)
[Publications] Higashida,H.,Zhang,J S., et al.: "Angiotensin II cyclic ADP-ribose formation in rat cardiac myocytes."Biochem.J.. 352. 197-202 (2000)
[Publications] Hotta,T.,Asai,K. et al.: "Membrane-bound form of ADP-ribosyl cyclase in rat cortical astrocytes in culture."J.Neurochem.. 74. 669-675 (2000)
[Publications] Hashii,M.,Minabe,Y. et al.: "cADP-ribose potentiates cytosolic Ca2+ elevation and Ca2+ entry via L-type voltage-activated Ca2+ channels in NG108-15 neuronal cells."Biochem J.. 345. 207-215 (2000)
[Publications] Higashida,H.: "Slow Synaptic Responses and Modulation"Slow synaptic responses in neuronal tumor cells : dual regulation of ADP-ribosyl cyclase and inhibition of M-current by muscarinic receptor stimulation.. 35-41 (1999)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

神経細胞でサイクリックADPリボースは真のセカンドメッセンジャーか

Principal Investigator

東田 陽博 金沢大学, 医学部, 教授 (30093066)

Research Products

[Publications] Higashida,H.,Yokoyama,S.,Hashii,M. et al.: "Signal transduction from bradykinin, angiotensin, adrenergic and muscarinic receptors to effector enzymes, including ADP-ribosyl cyclase."Biological Chem.. 382. (2001)

[Publications] Higashida,H.,Hashii,M.,Yokoyama,S. et al.: "Cyclic ADP-ribose as a potential second messenger for neuronal Ca2+ signaling."J.Neurochem.. 76. 321-331 (2000)

[Publications] Higashida,H.,Zhang,J S., et al.: "Angiotensin II cyclic ADP-ribose formation in rat cardiac myocytes."Biochem.J.. 352. 197-202 (2000)

[Publications] Hotta,T.,Asai,K. et al.: "Membrane-bound form of ADP-ribosyl cyclase in rat cortical astrocytes in culture."J.Neurochem.. 74. 669-675 (2000)

[Publications] Hashii,M.,Minabe,Y. et al.: "cADP-ribose potentiates cytosolic Ca2+ elevation and Ca2+ entry via L-type voltage-activated Ca2+ channels in NG108-15 neuronal cells."Biochem J.. 345. 207-215 (2000)

[Publications] Higashida,H.: "Slow Synaptic Responses and Modulation"Slow synaptic responses in neuronal tumor cells : dual regulation of ADP-ribosyl cyclase and inhibition of M-current by muscarinic receptor stimulation.. 35-41 (1999)

東田陽博金沢大学, 医学部, 教授 (30093066)