2000 Fiscal Year Annual Research Report

病原性大腸菌毒素Stxによる腎水チャンネル(アクアポリン)障害検査法の開発

Research Project

Project/Area Number	12877390
Research Institution	University of Shizuoka
Principal Investigator	三輪匡男静岡県立大学, 薬学部, 教授 (10046287)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	菅谷純子静岡県立大学, 薬学部, 講師 (30098131)
Keywords	ベロ毒素 / 病原性大腸菌 / 水チャンネル / アクアポリン2 / 腎障害 / 溶血性尿毒症
Research Abstract	病原性大腸菌O157に感染すると腸管出血性大腸炎を発症し、重篤化すると溶血性尿毒症(HUS)を併発する。未だHUSの発症機序が明らかでなく、的確な治療法がないことから毒素による障害作用の解明が待たれている。本研究では尾静脈にStx1、Stx2を投与したラットで、尿細管障害の指標となる尿中のβ2-ミクログロブリンの変化が認められなかった毒素暴露24時間後に尿量の増加が観察され、投与48時間以後に有意に血漿浸透圧の上昇と尿浸透圧の低下が認められ、尿再吸収機構に重要な役割をしている集合管の障害を示唆する現象を認めた。そこで、集合管に存在する水チャンネルAQP2に対する抗AQP2ポリクローナル抗体を作製し、正常ラット尿及びStx1、Stx2投与したラットの尿中の抗体反応物質を測定すると、投与後24時間より有意に増加し48時間から72時間の間に8倍近くの急増を示した。致死作用が認められる20ng/kg以上の投与群では死亡する直前まで尿中に高いAQP2免疫反応性物質が検出された。毒素(Stx)に曝露されたラットで腎機能障害が顕著に認められない曝露早期に尿排泄量の増加を認め、排泄尿中に水チャンネル(アクアポリン、AQP2)抗体反応性物質を検出し、また腎細胞膜に存在するAQP2レベルが減少することを明らかにした。これらの知見はStx曝露により惹起される多尿の原因が尿細管、集合管に分布する水再吸収チャンネル機構の障害によることを強く示唆するものである。水チャンネルアクアポリン2(AQP2)の合成C末端15残基ペプチドを用いて免疫したウサギから得た抗AQP2ポリクローナル抗体を得ているが、単クローン抗体を組み合わせたより高感度なELISA法を確立するために、Balb/cマウス脾内に合成C末端ペプチド抗原を免疫し、この脾細胞を常法に従いミエローマ細胞と融合し抗体産生株を現在選択中である。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Naoki Unno et al: "Plasama platelet-activating factor acetylhydrolase deficiency is associated with atherosclerotic occlusive--"J.Vasc.Surg.,. 32. 263-267 (2000)
[Publications] Junko Sugatani et al: "Activation of coagulation in C57BL/6 mice given verotoxin 2 (VT2) and the effect of co-administration of"Thromb.Res.,. 100(1). 61-72 (2000)
[Publications] Junko Sugatani et al: "Disorders in the immune responses of T- and B-cells in mice administered intravenous verotoxine 2"Life Sci.. 67. 1059-1072 (2000)
[Publications] Junko Sugatani et al: "Inhibition of rabbit platelet aggregation by nucleoside 5'-alkylphosphates : Correlation with inhibition of agonist-"Biochem.Pharmacol.. 60. 197-205 (2000)
[Publications] Masanori Kuroyanagi et al: "Bicyclo [3.2 1] octane and 6-oxabicyclo [3.2.2] nonane type neolignans from Magnolia denudata"Chem.Pharm.Bull. 48. 832-837 (2000)
[Publications] Hong Xu et al.: "Platelet-activating factor acetylhydrolase gene mutation in Japanese children with Escherichia coli O157-associated"Am.J.Kidney Disease. 36. 42-46 (2000)
[Publications] Yukiko Mizutani et al.: "Cloning and expression of rat neutral sphingomyelinase : enzymologicalcharacterization and identification of --"Biochim.Biophys.Acta. 1485. 236-246 (2000)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

病原性大腸菌毒素Stxによる腎水チャンネル(アクアポリン)障害検査法の開発

Principal Investigator

三輪 匡男 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (10046287)

Research Products

[Publications] Naoki Unno et al: "Plasama platelet-activating factor acetylhydrolase deficiency is associated with atherosclerotic occlusive--"J.Vasc.Surg.,. 32. 263-267 (2000)

[Publications] Junko Sugatani et al: "Activation of coagulation in C57BL/6 mice given verotoxin 2 (VT2) and the effect of co-administration of"Thromb.Res.,. 100(1). 61-72 (2000)

[Publications] Junko Sugatani et al: "Disorders in the immune responses of T- and B-cells in mice administered intravenous verotoxine 2"Life Sci.. 67. 1059-1072 (2000)

[Publications] Junko Sugatani et al: "Inhibition of rabbit platelet aggregation by nucleoside 5'-alkylphosphates : Correlation with inhibition of agonist-"Biochem.Pharmacol.. 60. 197-205 (2000)

[Publications] Masanori Kuroyanagi et al: "Bicyclo [3.2 1] octane and 6-oxabicyclo [3.2.2] nonane type neolignans from Magnolia denudata"Chem.Pharm.Bull. 48. 832-837 (2000)

[Publications] Hong Xu et al.: "Platelet-activating factor acetylhydrolase gene mutation in Japanese children with Escherichia coli O157-associated"Am.J.Kidney Disease. 36. 42-46 (2000)

[Publications] Yukiko Mizutani et al.: "Cloning and expression of rat neutral sphingomyelinase : enzymologicalcharacterization and identification of --"Biochim.Biophys.Acta. 1485. 236-246 (2000)

三輪匡男静岡県立大学, 薬学部, 教授 (10046287)