生体内コンパートメント間での水移送における水チャネルの役割の細胞構造学的研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13137201
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (B)
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 高田 邦昭 群馬大学, 医学部, 教授 (20129290)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 青木 武生 群馬大学, 医学部, 助手 (70150919) ; 鈴木 健史 群馬大学, 医学部, 助手 (00261868) ; 萩原 治夫 群馬大学, 医学部, 助教授 (80189464)
• Keywords: 水チャネル / アクアポリン / AQP2 / 多重蛍光染色 / エンドソーム / EEA1 / 抗体

Research Abstract

ヒトをはじめとする高等動物アクアポリンには、10種以上のアイソフォームが存在するが、その分布や生理機能には不明の点が多い。これは、蛋白レベルでの解析が、適当な抗体が得られなくて困難なためである。そこで、多重免疫組織化学に使用可能な高アフィニティー、高特異性の抗体を得るために、新たにいくつかのアクアポリンについて、アイソフォーム特異的な部分のペプチドを化学合成して、モルモットと家兎を免疫した。現在までのところ、アクアポリン2(AQP2)について、モルモットと家兎で比較的良い抗体が得られている。モルモットで作製したアクアポリン2抗体を使って、ラット腎臓でのアクアポリン2の細胞内局在部位のマッピングを試みた。腎臓の0.3〜0.5ミクロメーターの凍結準超薄切片を作製し、小胞体(カルネキシン)、ゴルジ装置(ゴルジ58k)、トランスゴルジネットワーク(TGN38)、後期エンドソームやリソソーム(カテプシンD、1gP120)、早期/ソーティングエンドソーム(EEA1)などのオルガネラマーカーや、小胞輸送に関係する単量体低分子量G蛋白のRabとの多重免疫染色法をおこなった。その結果、細胞内のアクアポリン2は、これらの細胞内オルガネラとは異なる独自のコンパートメントに局在し、ごく少数のものが、早期,/ソーテイングエンドソームにあるのが判明した。

Research Products

• [Publications] Shinoda Y: "Expression of sugar transporters by in vivo electroporation and particle gun methods in the rat liver : Localization to specific membrane domains"Acta Histochem Cytochem. 34. 15-24 (2001)
• [Publications] Matsuzaki T: "Hypertonicity-induced expression of aquaporin 3 in MDCK cells"Am J Physiol. 281. C55-C63 (2001)
• [Publications] Suzuki T: "The apical localization of SGlt1 glucose transporter is determined by the short amino acid sequence In its N-terminal domain"Eur J Cell Biol. 80. 765-774 (2001)
• [Publications] Takata K: "Glucose transporters-----Localization to specific membrane domains"電子顕微鏡. 36. 23-25 (2001)
• [Publications] 高田邦昭: "組織細胞化学2001 (日本組織細胞化学会編)"学際企画. 8 (2001)