新規癌抑制タンパク質p110γによる細胞癌化抑制メカニズムの解明

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13216115
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• Principal Investigator: 佐々木 雄彦 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 研究員 (50333365)
• Keywords: リン脂質 / シグナル伝達 / 細胞増殖 / ノックアウトマウス / PI 3-kinase / 細胞癌化抑制

Research Abstract

1,7種のヒト大腸癌細胞株においてp110γmRNAは発現していたが,p110γタンパク質が消失していたことから,p110γの発現がタンパク質レベルで調節される可能性が示唆された。
2,ヒト大腸癌細胞株HCT116とDLD-1での強制発現実験系において,野生型p110γの発現はフォーカス形成能低下,軟寒天培地内でのコロニー形成低下,ヌードマウス皮下での腫瘍形成能の低下を引き起こした。また,点変異導入によるPI3K活性不活型p110γの発現は,野生型p110γ発現と同等の作用を示した。このれらことから,癌抑制作用に酵素活性は重要でなく,なんらかのタンパク質との会合が重要であることが示唆された。
3,p110γのRas結合ドメイン,C2ドメイン,キナーゼドメイン,結晶構造解析により見いだされた特徴的なヘリカルドメインおよびN末端領域の,計5種類のp110γ部分断片の発現ベクターを構築し,これらの導入細胞にて,フォーカス形成能,コロニー形成能の評価を試みた。N末端領域,C2ドメイン,ヘリカルドメイン,キナーゼドメインに関しては,現在のところ安定な発現に成功しておらず,包括的な結論は導けないものの,p110γのRas結合ドメインのみの発現も全長p110γと同程度の,フォーカス形成能,コロニー形成能の低下が導かれるという予備的な知見を得た。
4,しかしながら,野生型p110γの発現はKi-ras欠損DLD-1細胞の軟寒天培地内でのコロニー形成も抑制した。P110γによる抑制がRasとの結合を介しているかに関しては今後,Ras結合ドメイン欠失p110γの発現により検討されるべきである。
5,野生型p110γを安定に発現するクローナルなDLD-1細胞株を得た。HCT116細胞では樹立が困難であった。

Research Products

• [Publications] S. Clement: "The lipid phophatase SHIP2 controls insulin sensitivity"Nature. 409. 92-97 (2001)
• [Publications] T. Sasaki: "CD45 is a JAK phosphatase and negatively regulates cytokine receptor signaling"Nature. 409. 349-354 (2001)
• [Publications] C. Bony: "A specific role of phosphatidylinositol 3-kinase g : A regulation of autonomic Ca2+ oscillations in cardiac cells"J. Cell. Biol.. 152. 717-727 (2001)
• [Publications] N. Joza: "Essential role of the mitochondrial apoptosis-inducing factor in programmed cell death"Nature. 410. 549-554 (2001)
• [Publications] A. Suzuki: "T cell-specific loss of Pten leads to defects in central and peripheral tolerance"Immuni. 14. 523-534 (2001)
• [Publications] J. Penninger: "CD45 : new jobs for an old acquaintance"Nat. Immunol.. 2. 389-396 (2001)