神経芽細胞腫を標的とする遺伝子治療の基礎的研究と臨床展開

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13218029
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 辻 浩一郎 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (50179991)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 真部 淳 東京大学, 医科学研究所, 助手 (20292849) ; 山下 直秀 東京大学, 医科学研究所, 教授 (90174680)
• Keywords: 神経芽細胞腫 / 遺伝子治療 / interleukin-2 / lymphotactin

Research Abstract

1)再発性・治療不応性神経芽細胞腫に対する遺伝子治療のための基礎的検討 再発性・治療不応性神経芽細胞腫に対する遺伝子治療実施の可能性の検討のために、進行性神経芽細胞腫患者の骨髄細胞からの神経芽細胞腫細胞の初代培養法の確立を試みた。stageIVの神経芽細胞腫患児の親権者より同意を得た後、10例の患児から採取された骨髄細胞を用いて培養を開始した。骨髄単核細胞をEHS-Natrixを塗布されたプラスチックフラスコに入れ、10%ウシ胎仔血清添加RPMI-1640液中で培養した。継代にはトリプシン+EDTAを用いた。神経芽細胞腫細胞の同定は、光顕的観察、フローサイトメトリーによる細胞表面GD2発現解析、組織免疫染色によるNeurofilament、NSE等の発現解析、RT-PCRによるTyrosine hydroxylaseの検出等により行った。その結果、4例において、7-14日後に神経芽細胞腫細胞の増殖が見られた。3例が初発時の凍結骨髄、1例が再発時の新鮮骨髄であった。増殖した神経芽細胞腫細胞には、比較的容易にinterleukin(IL)-2およびlymphotactin遺伝子の導入が可能であった。
2)再発性・治療不応性神経芽細胞腫に対する遺伝子治療プロトコールの提案 上記の基礎的検討結果に基づき、遺伝子治療プロトコールを作成し、東京大学医科学研究所倫理審査委員会に提出した。その審査を経た後、文部科学省科学技術・学術審議会および厚生科学審議会科学技術部会に「再発性・治療不応性神経芽腫に対するサイトカインとケモカインを用いた免疫遺伝子治療(第I相臨床研究)」として申請を行った。現在その審議の結果を待っている段階である。

Research Products

• [Publications] Matsui A: "gp 130 and c-kit signals synergistically induce thrombopoietin production by hematopoietic cells"Int J Hematol. 72. 455-462 (2001)
• [Publications] Matsuoka S: "CD34 expression on long-term repopulating hematopoietic stem cells changes during developmental stages"Blood. 97. 419-425 (2001)
• [Publications] Takahashi T: "Surface protein D and KL-6 as serological indicators of Pneumocystis carinii pneumonia in a child with acute lymphoblastic leukemia"J Med. 32. 41-51 (2001)
• [Publications] Xu M: "Evidence for the presence of primitive megakaryopoiesis in the early yolk sac"Blood. 97. 2016-2022 (2001)
• [Publications] Yoshimasu T: "Prompt and durable hemnatopoietic reconstitution by an unrelated cord blood transplantation in a child with Fanconi anemia"Bone Marrow Transplant. 27. 767-769 (2001)
• [Publications] Ma F: "Development of human lymphohematopoictic stern/progenitor cell s defined by CD34 and CD81 expressions"Blood. 97. 3755-3762 (2001)
• [Publications] Miyamolo K: "Inhibitory effect of interleukin-3 on the early development of human B-lymphopoiesis"Br J Haematol. 114. 690-697 (2001)
• [Publications] Hisakawa H: "Human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) stimulates primitive and defintive erytliropolesis in mouse embryo expressing hGM-CSF receptors but not erythropoietin"Blood. 98. 3618-3625 (2001)
• [Publications] Tsuji K: "Expression of G-CSF receptor on myeloid progenitors"Leukemia & Lymphoma. 42. 1351-1357 (2001)
• [Publications] Ma F: "Growth of human T-cell acute lymphoblastic leukemia lymphoblasts in NOD/SCID fetal thymus organ culture : a possible role of the expression of IL-7 receptor in the proliferation of T-lymphoid leukemic cells"Leukemia. (in press).
• [Publications] 辻浩一郎: "Blackfan-Diamond症候群"小児科診療. 64. 188 (2001)
• [Publications] 辻浩一郎: "試験管内造血幹細胞増幅"現代医療. 33. 2011-2015 (2001)
• [Publications] 辻浩一郎: "造血幹細胞コロニー刺激因子と膀帯血造血幹細胞の体外増幅"日本産婦人科・新生児血液学会誌. 10. 33-36 (2001)
• [Publications] 浅野茂隆: "ES細胞を用いた組織再生の基礎"整形・災害外科. 44. 865-869 (2001)
• [Publications] 辻浩一郎: "造血幹細胞のex vivo増幅の現状"分子細胞療法2. 450-453 (2001)
• [Publications] 辻浩一郎: "造血幹細胞"小児科診療. 64. 2157-2162 (2001)
• [Publications] 辻浩一郎: "幹細胞を利用した再生医療"小児内科. 34. 37-41 (2001)
• [Publications] 辻浩一郎: "サイトカインを用いた造血幹細胞増幅"血液・腫瘍科. (印刷中).
• [Publications] 辻浩一郎: "血液細胞の再生医学"ゲノム医学. (印刷中).
• [Publications] Tsuji K, Ueda T, Ebihara Y: "Methods in Molecular Medicine-Cytokines and Colony Stimulating Factors"Cytokine mediated expansion of human NOD/SCID-repopulating cells (in press). (2001)
• [Publications] 田中竜平, 辻浩一郎: "造血器疾患治療マニュアル"浅野茂隆, 池田康夫, 内田卓編, メディカルレビュー社(印刷中).
• [Publications] 辻浩一郎: "必携造血幹細胞移植-わが国のエビデンスを中心に-"小寺良尚, 加藤俊一編, 医学書院(印刷中).
• [Publications] 辻浩一郎: "小児白血病ハンドブック"月本一郎編, 中外医学社(印刷中).