HIVライフサイクルに必須な細胞因子の同定および新しい抗HIV薬の標的探索

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13226027
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 山本 直樹 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (00094053)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山岡 昇司 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (90263160)
• Keywords: HIV / AIDS / 変異原 / pseudotype / マウス白血病ウイルス / CXCR4 / KRH-1636 / 経口吸収性

Research Abstract

変異原で処理してからHIVによる細胞死に抵抗性を示す細胞を樹立する試みでは、調べたT細胞株の中でもっとも容易に感染・死滅するMT4を選択した。HIVに曝露したのち約一干万個の未処理MT4細胞がウイルス遺伝子を発現して細胞死に陥る実験条件は、M.O.I.10以上のHIV pseudovirusを連日3回感染させることによって定めた。約四千万個のMT4細胞に6回の変異原処理をを行って生存細胞集団が得られ、それらのゲノムをPCR法で調べたところ、HIVプロウイルスを持つプールと持たないプールがあった。しかしそのいずれもが再度のHIV感染によってほとんどが死滅し、再現性をもってHIVによる細胞死に抵抗性を示す変異細胞はまだ樹立されていない。その一方で、ヒト単球系潜伏感染細胞であるJ22細胞および293T細胞からMT4と同様のスクリーニングを経てHIV感染による細胞死に抵抗性の細胞株が得られた。J22から得られた細胞クローンはマウス白血病ウイルスに対しても感染抵抗性を示し、293T細胞から得られた細胞は親株とほぼ同程度のマウス白血病ウイルスへの感染性を示した。
CXCR4アンタゴニストの研究では、KRH1636がラットでの経口ならびに静脈内投与で血中濃度においてdose responseが見られなかった。このことは肝臓での薬物の蓄積性を示唆したため、さらにKRH1636をプロトタイプとしてその誘導性を53種類作成し、KRH1636の問題点の解決に努めた。その結果、T-2731, T-2652と名付けた2種の誘導体を新たに見出した。これらの物質は抗HIV活性については1万倍を越える化学療法係数を維持しながら、問題となっていた経口吸収性と血中での短時間での分解という難点がほほ解決され、高経口吸収性で血中持続時間の長い薬物であることがわかった。

Research Products

• [Publications] Ichiyama, K., Yokoyama, S., Tanaka, Y., Tanaka, R., Hirose, K., Bannai, K., Edamatsu, T., Yanaka, M., Niitani, Y., Kurosaki, N., Takaku, H., Koyanagi, Y., Yamamoto, N.: "A duodenally absorbable CXCR4 antagonist, KRH-1636, exhibits a potent and selective anti-HIV-1_activity in vivo and in vitro"Proc. Nat. Acad. Sci. USA.. (in press).
• [Publications] Dewan, Z., Terashima, K., Taruishi, M., Hasegawa, H., Ito, M., Tanaka, Y., Mori, N., Sata, T., Koyanagi, Y., Maeda, M., Kubuki, Y., Okayama, A., Fujii, M., Yamamoto, N.: "Rapid tumor formation of HTLV-1-infected cell Lines in novel NOD-SCID/γc^<null>(NOG) mice : Suppression by an inhibitor against NF-_κB"J. Virol.. (in press).
• [Publications] K.Motomura, S.Kusagawa, H.H.Lwin, M.Thwe, K.Kato, K.Oishi, N.Yamamoto, T.Nagatake, Y.Takebe: "Different subtype distributions in two cities in Myanmar : Evidence for independent clusters of HIV-1 transmission"AIDS. (in press).
• [Publications] Y.Miura, N.Misawa, Y.Kawano, H.Okada, Y.Inagaki, N.Yamamoto, M.Ito, H.Yagita, K.Okumura, H.Mizusawa, Y.Koyanagi: "TNF-related apoptosis-inducing ligand induces neuronal death in amurine model of HIV-CNS infection"Proc. Nat. Acad. Sci. USA.. (in press).
• [Publications] M.Kawahara, K.Matsuo, T.Nakasone, T.Hiroi, H.Kiyono, S.Matsumoto, T.Yamada, N.Yamamoto, M.Honda: "Combined intrarectal/intradermal inoculation of recombinant Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin (BCG) induces enhanced immune responses against the inserted HIV-1 V3 antigen"Vaccine. 1321. 158-166 (2002)
• [Publications] S.M.Owen, D.Rudolph, D.Schols, N.Fujii, N.Yamamoto, R.B.Lal: "Susceptibility of diverse primary HIV isolates with varying co-receptor specificity's to CXCR4 antagonistic compounds"J Med Virol.. 68. 147-155 (2002)