2001 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子変異調節マウスによるギャップ結合蛋白多重発現制御系の分子解剖学的研究
Project/Area Number |
13470004
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Research Institution | Kyushu University |
Principal Investigator |
柴田 洋三郎 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (90037482)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西井 清雅 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (20264020)
稲井 哲一朗 九州大学, 大学院・医学研究院, 講師 (00264044)
中村 桂一郎 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (20172398)
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Keywords | 心臓 / ギャップ結合 / コネキシン / gene trageting / heart / gap junction / connexin / Cre / loxp |
Research Abstract |
1.条件下Cx45欠損マウス作製のため、ターゲティングベクターを構築した。ベクターは相同組換えによりES細胞に導入され、germline chimeraが得られた。その子孫を今後、心筋、平滑筋、血管内皮細胞のそれぞれに特異的にCreを発現するマウスと交配し、Cx45の組織特異的な機能特性を明らかにしたい。 2.Cx45遺伝子変異マウスのヘテロ接合体を用いたマーカー遺伝子(nls-lacZ)の発現解析により、脳神経系におけるCx45の発現パターンが立体的に明らかとなった。特に視床における強い発現はこれまでに報告がない新しいものである。 3.Cx45の機能解析を進めるため、Cx45のダブルノックアウトES細胞を作製して、その細胞分化系譜を解析している。Cx45のダブルノックアウトES細胞は、胎生早期に排除されて成熟組織になることができない。細胞表面に存在するギャップ結合の互換性や、それにまつわる細胞内反応系の異常があるとの仮説を検証中である。 4.胎生8.5日胚を用いたDNAマクロアレイ解析の結果をもとに、Cx45欠損胚を各種免疫染色して胎生死の分子機構の詳細を解析中である。 5.Cx43-Cx45ダブルノックアウトマウスを作製して、受精卵からの発生状況を微小滴培養系により解析している。 6.タイト結合蛋白claudin-1の変異体をMDCK細胞に発現させ、claudin-1のタイト結合への局在化機構について新しい知見を得て論文として発表した。 7.大阪府立成人病センター研究所生化学部門瀧原研究室との共同研究において、Rae28トランスジェニックマウスが引き起こす拡張型心筋症の、電子顕微鏡による微細胞解析を行った。(Lab Invest, in press)
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Research Products
(6 results)
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[Publications] I.Yamanaka et al.: "Differential expression of major gap junction proteins, connexins26 and 32, in rat mammary glands during pregnancy and lactation"Histochem Cell Biol. 115. 277-284 (2001)
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[Publications] H.Iida et al.: "Spermatid-specific expression of Iba 1, an ionized calcium binding adapter molecule-1, in rat testis"Biol Reprod. 64. 1138-1146 (2001)
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[Publications] K.Nishii et al.: "Regulation of the epithelial-mesenchymal transformation through gap junction channels in heart development"Trends Cardiovasc Med. 11. 213-218 (2001)
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[Publications] Y.Shibata et al.: "Diversity and molecular anatomy of gap junction"Med Electon Microsc. 34. 153-159 (2001)
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[Publications] J.Kobayashi et al.: "Formation of tight junction strands by expression of claudin-1 mutants in their ZO-1 binding site in MDCK cells"Histochem Cell Biol.. 117. 29-39 (2002)
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[Publications] 柴田 洋三郎: "ギャップ結合の微細構造と分子生物学"電子顕微鏡. 36. 156-162 (2001)