新規ヒト環状1本鎖DNAウイルス(TTV)の増殖機構および転写様式の解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470067
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 岡本 宏明 自治医科大学, 医学部, 助教授 (30177092)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 雅春 自治医科大学, 医学部, 助手 (70326841)
• Keywords: TTウイルス(TTV) / 1本鎖環状DNAウイルス / 複製中間体 / mRNA / Transfection / 培養細胞 / 好中球

Research Abstract

TTウイルス(TTV)は、1997年に研究代表者らがわが国の原因不明の輸血後肝炎患者から世界ではじめて分離した環状1本鎖DNAウイルスであり、その増殖機構はほとんど未解明のままである。前年度の研究により、TTVは肝臓のみならず、感染個体の肺、骨髄、脾臓、甲状腺、膵臓、腎臓、筋肉、リンパ節などの種々の臓器や組織で増殖していることを実証できた。今年度はさらに末梢血中でもTTVが広く種々の血液細胞内に分布し、その濃度が血液細胞のsubpopulationによって異なっていること、さらに興味深いことに好中球ではBリンパ球やTリンパ球よりも100倍から1000倍TTV DNA titerが高いことを明らかにすることができた。TTVの増殖機構を明らかにする目的で、種々の細胞株を用い、細胞培養系の確立を試みたが、残念ながら現時点で成功していない。そこで、もう一つのアプローチとして、研究代表者らがB型肝炎ウイルスの培養系での研究を進めてきたように(Okamoto et al.,J Virol 61:3030-3034,1987;J Gen Virol 71:959-963,1990;J Gen Virol 74:407-414,1993)、完全長TTV DNA(3,853塩基長)のtandem dimerを挿入した組換えplasmid DNAを作製し、HepG2細胞、Huh7細胞にtransfectした。コントロールとしてmonomerの完全長TTV DNAを挿入したplasmid DNAを用いた。その結果、TTV DNAのtandem dimerをtransfectした場合のみ、細胞株がHepG2とHuh7のどちらであってもTTVに特異的な3.0kb、1.2kbおよび1.0kbからなる3種類のmRNAの産生を確認することができた。複製中間体としての2本鎖DNAおよびウイルス粒子の産生の有無については現在、解析中である。

Research Products

• [Publications] Takahashi M.: "TT virus is distributed in various leukocyte subpopulations at distinct levels, with the highest viral load in granulocytes"Biochemical and Biophysical Research Communications. 290. 242-248 (2002)
• [Publications] Yokoyama H.: "Pathological changes of renal epithelial cells in mice transgenic for the TT virus ORF1 gene"Journal of General Virology. 83. 141-150 (2002)
• [Publications] Okamoto H.: "Genomic characterization of TT viruses (TTVs) in pigs, cats and dogs and their relatedness with species-specific TTVs in primates and tupaias"Journal of General Virology. 83. 1291-1297 (2002)
• [Publications] Peng Y.H.: "Analysis of the entire genomes of thirteen TT virus variants classifiable into the fourth and fifth genetic groups, isolated from viremic infants"Arch Virol. 147. 21-41 (2002)
• [Publications] Tokita H.: "High TT virus load as an independent factor associated with the occurrence of hepatocellular carcinoma among patients with hepatitis C virus-related chronic liver disease"Journal of Medical Virology. 67. 501-509 (2002)
• [Publications] Ohto H.: "TT virus infection during childhood"Transfusion. 42. 892-898 (2002)