動脈管に存在する、酸素で閉じるカリウムチャンネルに関する分子生物学的研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470214
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 中西 敏雄 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (90120013)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 相羽 純 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (80138891) ; 松岡 瑠美子 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (50120051) ; 萩原 誠久 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (00180802) ; 中沢 誠 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (10075567)
• Keywords: 動脈管 / カリウムチャンネル / 酸素 / クローニング / 遺伝子

Research Abstract

1.動脈管にのみ発現しているKチャンネル遺伝子の検索:
1)分子生物学的研究
牛胎仔から動脈管を摘出し、mRNAを抽出し、cDNAライブラリーを作製した.その中から、Kチャンネルのαおよびβサブユニット部分より作製したDNAプローベを用い、Kチャンネルに関係した遺伝子をスクリーニングした.現在、Kチャンネルのクローニング中である.
またDifferential display法を用いた遺伝子検索も行った.即ち、牛胎仔から動脈管、肺動脈、大動脈を摘出し、mRNAを抽出した.RT-PCR法を用いてcDNAを増やした後、蛍光イメージアナライザーを使用したDifferential display法を用いて、動脈管にのみ発現している遺伝子を検索した.現在、その中から、Kチャンネルのαおよびβサブユニット部分より作製したDNAプローベを用い、Kチャンネルに関係した遺伝子をスクリーニング中である.
2.アフリカツメガエル卵母細胞を用いた機能発現法によるKチャンネルクローニング:
アフリカツメガエルの卵母細胞を用い、動脈管Kチャンネルの遺伝子発現を調べた.
Total mRNAを蔗糖濃度勾配により分画し、各分画mRNAを卵母細胞に注入し、酸素感受性Kチャンネルの発現をみた分画からcDNAライブラリーの作製を行ったのち、cDNA,cRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入して酸素感受性Kチャンネルの発現をスクリーニングし、クローニングを試みている.