核内レセプターによる生体機能調節機構の解明に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470215
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 田中 廣壽 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00171794)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 半田 宏 東京工業大学, フロンティア創造研究センター, 教授 (80107432)
• Keywords: 遺伝子 / 転写 / 核酸 / 生理学 / 病理学 / 内分泌学 / 薬理学 / 分子生物学

Research Abstract

申請者は、代表的核内レセプターであるグルココルチコイドレセプター(GR)の分子生物学的研究を過去10年間にわたり継続し、その転写調節における意義を明らかにしつつある。そこで、これまでの研究で得られた成果と技術を基盤に、GRをモデルとして核内レセプターによる生体機能調節機構を明らかにすることを目的とした。
1.GR遺伝子破壊細胞を作成しGR標的遺伝子を同定するとともにその機能を明らかにした
RNAiを用いてGRをノックダウンする系、Cre-loxシステムを用いたアデノウイルスによるGR発現系を立ち上げ、すでにいくつかの細胞で動作を確認した。GR標的遺伝子発現を確認したとともに、各組織におけるグルココルチコイドの作用機構を解明した。
2.GR遺伝子破壊マウスを用いてGRとその標的遺伝子の生理機能に与える作用を明らかにした
G.Schutz博士(ドイツ癌研究センター)との共同研究により、GR遺伝子破壊マウスを各種条件下で飼育後屠殺し、各組織よりRNAを抽出後DNAチップなどを用いてGR標的遺伝子の発現プロフィールを解析した。
3.グルココルチコイドによる組織特異的遺伝子発現調節機構を明らかにした
合成グルココルチコイドであるコルチバゾールCVZを用いて、GRのリガンド結合領域の機能的多様性を実証した。また、AF-1転写活性化領域に作用する共役因子のレパートリーはCVZ結合GRとDEX結合GRでは明らかに異なり、リガンドによる組織特異的グルココルチコイド応答性遺伝子発現機構が明らかにされた。質量分析法を用いたプロテオーム解析やクロマチン免疫沈降法などを用いてより詳細な分子機構を解明した。

Research Products

• [Publications] Tsunenori Kodama, et al.: "Role of the Glucocorticoid Receptor for Regulation of Hypoxia-dependent Gene Expression"J.Biol.Chem.. 278・35. 33384-33391 (2003)
• [Publications] Rika Ouchida, et al.: "Suppression of NF-κB-dependent gene expression by a hexamethylene bisacetamide-inducible nuclear protein HEXIM1 in human vascular smooth muscle cells."Genes to Cells. 8・2. 95-107 (2003)
• [Publications] Matsumoto M., et al.: "Induction of renoprotective gene expression by cobalt ameliorates ischemic injury of the kidney in rats."J.Am.Soc.Nephrol.. 14・7. 1825-1832 (2003)
• [Publications] Yuichi Makino, et al.: "Hypoxia-Inducible Factor Regulates Survival of Antigen Receptor-Driven T Cells."J.Immunol.. 171・12. 6534-6540 (2003)