独自に開発したDNAチップを用いた効果的化学療法の遺伝子学的選択法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470426
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 鵜澤 一弘 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (30302558)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 関 直彦 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (50345013) ; 横江 秀隆 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (70261930) ; 丹沢 秀樹 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50236775)
• Keywords: DNAチップ / 口腔扁平上皮癌 / 化学療法 / 薬剤感受性

Research Abstract

市販されている高価な汎用DNAチップに対して、私達の研究グループでは口腔領域由来組織(正常粘膜、悪性腫瘍、転移リンパ節等)からオリゴキャップ法を用いて作成したcDNA libralyを基にして口腔領域専用DNAチップを作成した。このDNAチップを用いて、抗がん剤感受性の評価法を確立するために、以下の実験を行ない、結果を得た。
1)口腔扁平上皮癌由来細胞株から誘導・選別した抗癌剤耐性細胞株からtotal RNAを抽出した。
2)これらのtotal RNA各20μgを用いて、DNAチップ上でハイブリダイゼーションを行なった。
3)Microarray Scannerで読み込んで、コンピューター解析により、抗がん剤に対する高感受性群と低感受性群における遺伝子発現の相違を調べた。
4)さらに、抗がん剤を培養液中に加えて、抗がん剤に対する高感受性群と低感受性群における、遺伝子発現の相違を調べるため、それぞれの細胞株からtotal RNAを抽出した。使用した抗がん剤はCDDPと5FUである。
5)これらのtotal RNA各20μgを用いて、DNAチップ上でハイブリダイゼーションを行なった。
6)Microarray Scannerで読み込んで、コンピューター解析により、抗がん剤に対する高感受性群と低感受性群における遺伝子発現の相違を調べた。
7)これらの結果から、特に、20種類ほどの遺伝子の発現パターンが抗がん剤に対する高感受性群と低感受性群において異なっていることをRT-PCRで確認した。
8)実際の患者さんから採取した組織から抽出・精製したRNAを用いて、Microarrayにより、遺伝子の発現パターンと抗がん剤に対する感受性との間に、臨床的に相関を有する遺伝子を絞り込んだ。
以上の研究により統計学的に薬剤感受性に相関を明瞭に認めた遺伝子はCDDPに対するCD55のみであった。(他の遺伝子は、症例や細胞株の相違により統計学的に有意な相関を認めなかった。)