2003 Fiscal Year Annual Research Report

生物活性二次代謝産物に見る多様性の分子基盤の解析と展開

Research Project

Project/Area Number	13480185
Research Institution	Tokyo Institute of Technology
Principal Investigator	柿沼勝己東京工業大学, 大学院・理工学研究科, 教授 (90092543)
Keywords	ポリケチド / マクロリド / アミノ配糖体抗生物質 / 糖転移酵素 / 二次代謝 / 基質特異性 / 糖質環化酵素 / ビセニスタチン
Research Abstract	本研究は、二次代謝系の多様性発現基盤を遺伝子解析と反応特異性の観点から明らかにし、有用物質生産に資することを目的とし、(1)ラクタムポリケチドビセニスタチンの生合成における糖転移酵素遺伝子vinCの破壊株を樹立し、またスタータ活性化に関わるvinM及びvinNの発現系を確立し、酵素精製と機能解析を進めた。(2)VinCを大量精製し、基質本体をdTDP-ビセニサミンと証明した。さらにアグリコンの異性体ネオビセニスタチンアグリコンを新たに合成し、糖転移反応が天然型と同効率で進行することを示した。全く異なる骨格を持つBrefeldin A及びEstradiolをビセニサミン受容体として全く新規な配糖体の創製に成功し、VinCが適切な疎水性結合と分子サイズにより多様なアグリコンを認識出来ることを示した。(3)ビセニスタチン生産菌に発見した新規ポリケチド合成酵素に対応する代謝物を精査し、新規28員環マクロリドHalstoctacosanolide A及びBを単離構造決定し、その生合成遺伝子の約70%を解読した。(4)イソプレノイド生合成の精密解析プローブとして完全重水素化メバロノラクトンの実用的不斉合成法を開発し、放線菌のジテルペン環化酵素の反応機構を動的に解明した。(5)放線菌Streptoalloteichus hindstanusのアミノ配糖体生合成遺伝子の解析を進め、糖質環化酵素遺伝子を大量発現して機能を確認した。クラスター内での読み枠の配列はブチロシンのそれと相違し、糖質環化酵素とアミノ基転移酵素が隣接していた。放線菌に比し、Bacillus属の遺伝子クラスターの特異性が明らかとなった。(6)ブチロシン生合成においてパロマミン生成に関わるグルコサミン活性化酵素BtrD及び糖転移酵素BtrMについて、破壊株の造成または発現酵素による反応解析により機能を明らかにした。

Research Products

(9 results)

All Other

All Publications (9 results)

[Publications] Eriko Nango: "Reaction Stereochemistry of 2-Deoxy-scyllo-inosose Synthase. The Key Enzyme in the Biosynthesis of 2-Deoxystreptamine-containing Aminoglycoside Antibiotics"Chemistry Letters. 32・5. 438-439 (2003)
[Publications] Takashi Yukita: "Biosynthesis of (2R)-4-Amino-2-hydroxybutyric Acid, Unique and Biologically Significant Substituent in Butirosins"Journal of Antibiotics. 56・5. 497-500 (2003)
[Publications] Tadashi Eguchi: "Importance of Isopropylidene Functionality of Di-O-Geranyl-geranyl Glycerol for the Biosynthesis of Archaeal Macrocyclic Membrane Lipids"Tetrahedron Letters. 44・16. 3275-3279 (2003)
[Publications] Tadashi Eguchi: "Practical Enantioselective synthesis of Fully Deuterated (R)-Mevalonolactone"Tetrahedron. 59・32. 6035-6038 (2003)
[Publications] Tadashi Eguchi: "A New Approach for the Investigation of Isoprenoid Biosynthesis Featuring Pathway Switching, Deuterium Hyperlabeling and ^1H NMR Spectroscopy. The Reaction Mechanism of a Novel Streptomyces Diterpene Cyclase"Journal of Organic Chemistry. 68・14. 5433-5438 (2003)
[Publications] Eriko Nango: "Active Site Mapping of 2-Deoxy-scyllo-inosose Synthase, the Key Starter Enzyme in the Biosynthesis of 2-Deoxystreptamine. Mechanism-based Inhibition and Identification of Lys-141 as an Entrapped Nucleophile"Journal of Organic Chemistry. 69・3. 593-600 (2004)
[Publications] Yasushi Ogasawara: "Cloning, Sequencing and Functional Analysis of the Biosynthetic Gene Cluster of Macrolactam Antibiotic Vicenistatin in Streptomyces halstedii"Chemistry and Biology. 11・1. 79-86 (2004)
[Publications] Tadashi Eguchi: "Structure Revision of FD-891, a 16-Membered Macrolide Antibiotic"Journal of Antibiotics. 57・2. 156-157 (2004)
[Publications] Shigehiro Tohyama: "Genome-Inspired Search for New Antibiotics. Isolation and Structure Determination of 28-Membered Polyketide Macrolactones, Halstoctacosanolides A and B, from Streptomyces halstedii HC34"Tetrahedron. 60(印刷中). (2004)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

生物活性二次代謝産物に見る多様性の分子基盤の解析と展開

Principal Investigator

柿沼 勝己 東京工業大学, 大学院・理工学研究科, 教授 (90092543)

Research Products

[Publications] Eriko Nango: "Reaction Stereochemistry of 2-Deoxy-scyllo-inosose Synthase. The Key Enzyme in the Biosynthesis of 2-Deoxystreptamine-containing Aminoglycoside Antibiotics"Chemistry Letters. 32・5. 438-439 (2003)

[Publications] Takashi Yukita: "Biosynthesis of (2R)-4-Amino-2-hydroxybutyric Acid, Unique and Biologically Significant Substituent in Butirosins"Journal of Antibiotics. 56・5. 497-500 (2003)

[Publications] Tadashi Eguchi: "Importance of Isopropylidene Functionality of Di-O-Geranyl-geranyl Glycerol for the Biosynthesis of Archaeal Macrocyclic Membrane Lipids"Tetrahedron Letters. 44・16. 3275-3279 (2003)

[Publications] Tadashi Eguchi: "Practical Enantioselective synthesis of Fully Deuterated (R)-Mevalonolactone"Tetrahedron. 59・32. 6035-6038 (2003)

[Publications] Tadashi Eguchi: "A New Approach for the Investigation of Isoprenoid Biosynthesis Featuring Pathway Switching, Deuterium Hyperlabeling and ^1H NMR Spectroscopy. The Reaction Mechanism of a Novel Streptomyces Diterpene Cyclase"Journal of Organic Chemistry. 68・14. 5433-5438 (2003)

[Publications] Eriko Nango: "Active Site Mapping of 2-Deoxy-scyllo-inosose Synthase, the Key Starter Enzyme in the Biosynthesis of 2-Deoxystreptamine. Mechanism-based Inhibition and Identification of Lys-141 as an Entrapped Nucleophile"Journal of Organic Chemistry. 69・3. 593-600 (2004)

[Publications] Yasushi Ogasawara: "Cloning, Sequencing and Functional Analysis of the Biosynthetic Gene Cluster of Macrolactam Antibiotic Vicenistatin in Streptomyces halstedii"Chemistry and Biology. 11・1. 79-86 (2004)

[Publications] Tadashi Eguchi: "Structure Revision of FD-891, a 16-Membered Macrolide Antibiotic"Journal of Antibiotics. 57・2. 156-157 (2004)

[Publications] Shigehiro Tohyama: "Genome-Inspired Search for New Antibiotics. Isolation and Structure Determination of 28-Membered Polyketide Macrolactones, Halstoctacosanolides A and B, from Streptomyces halstedii HC34"Tetrahedron. 60(印刷中). (2004)

柿沼勝己東京工業大学, 大学院・理工学研究科, 教授 (90092543)