ホヤ卵細胞質内で局在する組織決定因子の同定と解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13480245
• Research Institution: Tokyo Institute of Technology
• Principal Investigator: 西田 宏記 東京工業大学, 大学院・生命理工学研究科, 助教授 (60192689)
• Keywords: ホヤ / 初期胚発生 / 発生運命 / 母性mRNA / 卵細胞質因子 / ESTデーターベース / cDNAプロジェクト / 局在RNA

Research Abstract

ホヤは典型的なモザイク卵であり、発生の早い時期から各細胞は自律的分化能を持つ。その原因として、卵細胞質内組織決定因子が卵の中で既に特定の時期に片寄って存在していることが知られている。マボヤでは、受精卵の時期から植物半球後方の卵細胞質(PVC)に片寄って存在する母性因子が、筋肉の自律的分化、間充織・脊索の反応能に加え、胚後極の卵割パターン、前後軸形成などの過程において重要な役割を果たすことが、PVCの除去・移植実験などから示唆されている。現在までに、cDNAプロジェクトなどによって、受精卵の時期からPVCに片寄って存在するmRNAが多く発見され、それらはTypc1 postplasmic mRNAと呼ばれている。マボヤのTypc1 mRNAには、macho-1、HrPEMなどが既に知られており、解析がなされている。我々は、マボヤ卵のPVCに局在する母性mRNAの機能解析を目的として、マボヤ卵に存在する母性mRNAのcDNAプロジェクトデータベース(MAGEST)のデータから、8細胞期の胚後極に局在するmRNAを網羅的に選び出し、受精卵、8細胞期においてin situ hybridizationを行った。その結果、多くのクローンは受精卵の時期には局在しないが8細胞期までに胚後極に局在するTypc2 mRNAであることが明らかになった。Type1 mRNAは、既知のものも含めて9種類であった。そこで、Type1 mRNAの中で、全長の塩基配列がわかっていなかったものについてその配列を明らかにし、いくつかは脊椎動物の遺伝子とホモロジーが高いことがわかった。それらは、macho-1、HrPEM、RNA結合タンパク(HrPEM-3)・Hrwnt-5、Zn fingerタンパク(HrZF-1)、serine/threonine kinase(HrPOPK-1)、glucose transporter、g1-related protein、no homologyの9種であった。現在、それらの初期発生における発現パターンを詳細に調べるとともに、6つのType1遺伝子について、アンチセンスモルフォリノを用いた機能解析を行っている。

Research Products

• [Publications] Hiroki Nishida, Kaichiro Sawada: "macho-1 encodes localized mRNA in ascidian eggs that specifies muscle fate during embryogenesis"Nature. 409. 724-729 (2001)
• [Publications] Michio Ogasawara: "A large-scale whole-mount in situ hybridization system : rapid one-tube preparation of DIG-labeled RNA probes and high throughput hybridization using 96-well silent screen plates"Zoological Science. 18. 187-193 (2001)
• [Publications] Takuya Minokawa, Kasumi Yagi, Kazuhiro W.Makabe, Hiroki Nishida: "Binary specification of nerve cord and notochord cell fates in ascidian embryos"Development. 128. 2007-2017 (2001)
• [Publications] Kenji Kobayashi, Hiroki Nishida: "Nuclear plasticity and timing mechanisms of the initiation of alkaline phosphatase expression in cytoplasm-transferred blastomeres of ascidians"Developmental Biology. 234. 510-520 (2001)
• [Publications] Makabe, K.W., その他8名: "Maternal genetic information stored in fertilized eggs of the ascidian, Halocynthia roretzi"Biology of Ascidian. 165-177 (2001)
• [Publications] Makabe, K.W., その他24名: "Large-scale cDNA analysis of the maternal genetic information in the egg of the ascidian, Halocynthia roretzi, for the gene expression catalog during development"Development. 128. 2555-2567 (2001)
• [Publications] Sebastien Darras, Hiroki Nishida: "The BMP signaling pathway is required together with the GQF pathway for notochord induction in the ascidian embryo"Development. 128. 2629-2638 (2001)
• [Publications] Sebastien Darras, Hiroki Nishida: "The BMP/CHORDIN antagonism controls sensory pigment cell specification and differentiation in the ascidian embryo"Developmental Biology. 236. 271-288 (2001)
• [Publications] Gil Jung Kim, Hiroki Nishida: "Role of FGF and MEK signaling pathway in the ascidian embryo"Development Growth and Differentiation. 43. 521-533 (2001)
• [Publications] Masahiro Tomioka, Takahito Miya, Hiroki Nishida: "Repression of zygotic gene expression the putative germline cells in ascidian embryos"Zoological Science. 19. 49-55 (2002)
• [Publications] Takahito Miya, Hiroki Nishida: "Isolation of cDNA clones for mRNAs transcribed zygotically during cleavage in the ascidian, Halocynthia roretzi"Development, Genes and Evolution. (印刷中). (2002)
• [Publications] Hiroki Nishida: "Specification of developmental fates in ascidian embryos : Recent advances in molecular approach to maternal determinants and signaling molecules"International Review of Cytology. (印刷中). (2002)
• [Publications] Hiroki Nishdia: "Patterning the marginal zone of early ascidian embryos : Localized maternal mRNA and inductive interactions"BioEssays. (印刷中). (2002)
• [Publications] Yutaka Satou, Kasumi Yagi, Kaoru S.Imai, Lixy Yamada, Hiroki Nishdia, Nori Satoh: "macho-1-related genes in Ciona embryos"Development, Genes and Evolution. (印刷中). (2002)