2003 Fiscal Year Annual Research Report

慢性関節リウマチの抑制性自己抗原:その遺伝子改変動物の作製と誘導関節炎の病態解析

Research Project

Project/Area Number	13557041
Research Institution	St.Marianna University School of Medicine
Principal Investigator	尾崎承一聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (00231233)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	杉野弘徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (50211305) 小川佳宏東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (70291424) 田中真生京都大学, 医学研究科, 助手 (10332719) 大本安一大塚製薬, 医薬第一研究所, 主任研究員吉崎和幸大阪大学, 健康体育部, 教授 (90144485)
Keywords	慢性関節リウマチ / ホリスタチン関連蛋白 / FRP / gp130-RAPS / コラーゲン誘導関節炎 / DBA / 1マウス / トランスジェニックマウス / ノックアウトマウス
Research Abstract	申請者は関節リウマチ(RA)患者滑膜cDNAライブラリーから、新たな自己抗原としてホリスタチン関連蛋白(FRP)、新規可溶型gp130-RAPS、および、新規な遺伝子をクローニングした。本研究ではRA関節炎におけるこれらの新規自己抗原の作用を明らかにするため、マウス実験的関節炎に対するFRPの投与効果の検証、および、ヒトRA類似の関節炎であるコラーゲン誘導関節炎の好発系DBA/1マウスからこれらの蛋白質の遺伝子改変マウスを作成することを目的として、以下の点を明らかにした。 (1)in vivoの系でのFRPの機能を解析するために、II型コラーゲンに対するモノクローナル抗体カクテルによるマウス関節炎モデルに対してFRPを投与した結果、関節炎の発症・病態の抑制が観察された。FRP投与マウスの関節局所ではc-fos,ets-2,IL-6,MMP-3,MMP-9の発現低下が認められ、これが関節炎抑制に関与していることが推定された(Kawabata et al.:Arthritis Rheum 50:660,2004)。(2)もう一つの新規遺伝子の全長cDNAのクローニングに成功した。この遺伝子はRBP1と37%のホモロジーを有する新規な蛋白質をコードしており、DNA結合蛋白に特有の構造を有していた。ノーザンブロット法による遺伝子発現解析から、滑膜のみならず各種臓器での発現が認められた。大腸菌に発現させたN末蛋白断片を抗原としたイムノブロットにより、RA患者血清中の24%に反応抗体を検出した。(3)FRPトランスジェニックマウスを作製するため、マウスFRP(mFRP)のトランスジーン(Col2a1-mFRPおよびCol2a1-FLAG-mFRP)を完成させた。これらのトランスジーンがII型コラーゲンプロモーターで発現が制御されることを確認したのち、Col2a1-FLAG-mFRPを制限酵素で切り出し直鎖状DNA断片を調整した。DBA/1マウスの前核期卵にトランスジーンを注入し、トランスジーン陽性のF0を野生型DBA/1と交配しF1をつくった。トランスジーン陽性のF0、F1のいずれも、野生型と比較してphenotypeに特に変化は認められなかったが、これらは実験的誘導関節炎の解析対象として有力なツールと考えられた。

Research Products

(3 results)

All Other

All Publications (3 results)

[Publications] Tanaka M., et al.: "Potential preventive effects of follistatin-related protein/TSC-36 onjoint destruction and antagonistic modulation of its autoantibodies in rheumatoid arthritis."Int.Immunol.. 15(1). 71-77 (2003)
[Publications] Kawabata D., et al.: "Ameliorative effects of follistatin-related protein/TSC-36 on joint inflammation in a mouse model of marthrites."Arthritis Rheum.. 50(2). 660-668 (2004)
[Publications] 尾崎承一: "治療学:薬物療法(免疫療法)。「内科学(第8版)」"朝倉書店(東京)杉本恒明、小俣政男、水野美邦編集. 2297 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

慢性関節リウマチの抑制性自己抗原:その遺伝子改変動物の作製と誘導関節炎の病態解析

Principal Investigator

尾崎 承一 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (00231233)

Research Products

[Publications] Tanaka M., et al.: "Potential preventive effects of follistatin-related protein/TSC-36 onjoint destruction and antagonistic modulation of its autoantibodies in rheumatoid arthritis."Int.Immunol.. 15(1). 71-77 (2003)

[Publications] Kawabata D., et al.: "Ameliorative effects of follistatin-related protein/TSC-36 on joint inflammation in a mouse model of marthrites."Arthritis Rheum.. 50(2). 660-668 (2004)

[Publications] 尾崎 承一: "治療学:薬物療法(免疫療法)。「内科学(第8版)」"朝倉書店(東京)杉本恒明、小俣政男、水野美邦編集. 2297 (2003)

尾崎承一聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (00231233)

[Publications] 尾崎承一: "治療学:薬物療法(免疫療法)。「内科学(第8版)」"朝倉書店(東京)杉本恒明、小俣政男、水野美邦編集. 2297 (2003)