死線期を伴う心停止ドナーのグラフト肝に生じる障害機序の解明とその予防法の確立

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13557103
• Research Institution: University of Tsukuba
• Principal Investigator: 大河内 信弘 筑波大学, 臨床医学系, 教授 (40213673)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤盛 啓成 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (50238622)
• Keywords: 肝移植 / 心停止ドナー / 死戦期 / 炎症性サイトカイン / トロンボキサン / プロテアーゼインヒビター / プロスタグランジン / クッパー細胞

Research Abstract

【目的】近年肝移植におけるドナー不足は深刻さを増し、心停止ドナーからの肝移植も試みられてはいるが初期グラフト機能不全を高率に引き起こすため現段階では不適当とされている。本研究の目的は心停止ドナー肝移植の成功に向け、P38MAPK抑制作用をもつ選択的TNF-α,IL-1β産生阻害剤FR167653及び強力なセリンプロテアーゼインヒビターであるnafamostat mesilateの温阻血再灌流障害における効果を明らかにするとともに、屍体肝グラフトのコンディショニング法を開発することである。【方法】雄性Wistar ratを使用し、5群に分け肝摘出再灌流実験を施行した。1)Heart beating群(HB群);心拍動下に肝摘出。6時間保存後再灌流。2)Non-heart-beating群(NHB群):呼吸停止から心停止を誘導し、心停止下に肝摘出。6時間冷保存後再灌流。3)nafamostat mesilate投与群(NM群):nafamostat mesilete投与後,NHB群と同様に肝摘出。冷保存後再灌流。4)FR167653投与群(FR群):FR167653投与後,NHB群と同様に肝摘出。冷保存後再灌流。5)FR167653+nafamostat mesilate投与群(FR+NM群):nafamostat mesilate及びFR167653投与後,NHB群と同様に肝摘出。冷保存後再灌流。5群とも灌流時間は1時間としその後にサンプルを採取した。検査項目は胆汁産生量、灌流液量、生化学検査、IL-1β,TNF-α,thromboxaneB2(TXB2),6-ketoPGF1α,leukotrieneB4,Cox-2,NF-kB, AP-1,病理組織(電顕、光顕)である。【結果】HB群と比し、NHB群でIL-1β,TNF-α,NF-κB, AP-1,TXB2,leukotrieneB4,Cox-2が有意に高く、FR+NM群ではNHB群に比し有意に低下した。病理所見でもFR, FR+NM群で肝類洞の微小循環障害が改善された。以上の結果から、FR167653とnafamostat mesilateは、温阻血再灌流障害時において、炎症性サイトカイン及びアラキドン酸カスケードのメディエーターを著明に抑制することが確認された。また、この2剤併用療法は屍体肝グラフトの肝類洞における微小循環保持に極めて有用であることが示唆された。【結語】心停止ドナーからの肝移植では死戦期(温阻血期)におけるIL-1β・TNF-αの抑制およびアラキドン酸カスケードの抑制が重要であると考えられた。FR167653とnafamostat mesilateの2剤併用療法は、屍体肝グラフトのコンディショニング法として効果があると考えられた。

Research Products

• [Publications] K Oikawa, N Ohkohchi, M Satoh: "Kupffer cells play an important role in the cytokine production and activation of nuclear factors of liver grafts from non-heart-beating donor"Transplant International. 15. 397-405 (2002)
• [Publications] M.Sat, N Ohkohchi, S.Tsukamoto: "Successful liver transplantation from agonal non-heart beating donor in pig"Transplant International. 16. 100-107 (2003)
• [Publications] S.Miyagi, N Ohkohchi K Oikawa: "The effect of FR167653 on warm ischemic/reperfusion injury of the liver graft from NHBD"Proceeding of the Congress of the European Society for Surgical Research. 247-251 (2002)
• [Publications] N Ohkohchi, K Oikawa, S Tsukamoto: "Supression of kupffer cell function and administration of protease inhibitor are the keys for successful liver Tx in non-heart beating donor"Proceeding of the Congress of the European Society for Surgical Research. 399-403 (2002)