直腸肛門奇形における骨盤底筋群ならびに神経・筋接合部の再生分化誘導療法の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13557146
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 下竹 孝志 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (90254341)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岩井 直躬 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (90128695)
• Keywords: 直腸肛門奇形 / 骨盤底 / 筋細胞 / 発生

Research Abstract

直腸肛門奇形マウスにおける骨盤底筋の発生に関する解析として、Sd/Sd系ミュータントならびにレチノイン酸処理奇形誘発マウス胎仔における骨盤底筋群の発生解析を行った。
1.Sd/Sd系ならびにRetinoic acid処理マウス胎仔の作成と子宮からの摘出
Sd系heterozygotesマウスの繁殖コロニーを樹立し交配によりhomozygotes胎仔を作成した。また、C57BL/6系マウスを交配させ膣栓の存在をもって妊娠を確認し、胎生9.0日目に100mg/kgのall trans-retinoic acid(ATRA)を経口投与、各系の妊娠マウス子宮から胎生9.5〜16.0の各日齢にて、実体顕微鏡下(Nikon model SMZ-U,×20〜75)にmicro-manipulatorを用いて胎仔を採取した。
2.先天性鎖肛モデルマウス胎仔における筋組織、筋分化誘導因子(MRFs)及び神経・筋接合部の発生動態の解析
採取した胎仔を直ちに4%paraformaldehyde溶液にて固定し、液化窒素にて凍結させクリオスタットにて矢状断ないし水平断にて薄切、連続切片とし、ここで筋細胞系のマーカーとして抗α-isoactin、desmin、myosin heavy chainの各抗体、筋分化誘導転写因子(myoD, MRF4,Myf5,myogenin)および神経・筋接合部の形成に関与する分子(agrin, synaptophysin等)に対する各特異抗体を用いて蛍光抗体法ならびに酵素抗体法にて染色を施行、光学/蛍光顕微鏡下に観察した。
これらの実験系の確立により、鎖肛モデルマウスにおける骨盤底筋群の発生研究が系統的に解析可能であることが確認された。

Research Products

• [Publications] Bitoh Y, Shimotake T, Sasaki Y, et al.: "Development of the pelvic floor muscles of murine embryos with anorectal malformations"Journal of Pediatric surgery. 37(2). 224-227 (2002)
• [Publications] Bitoh Y, Shimotake T, Kubota Y, et al.: "Impaired distribution of retioic acid receptors in the hindgut-tailgut regionof murine embryos with anorectal malformations"Journal of Pediatric Surgery. 36(2). 377-370 (2001)
• [Publications] Tomiyama H, Shimotake T, Ono S, et al.: "Relationship between the type of RET/GDNF/NTN or SOX10 gene mutations and long-term results after surgery fortotal colonic aganglionosis with small bowel involvement"Journal of Pediatric Surgery. 36(11). 1685-1688 (2001)
• [Publications] Shimotake T, Go S, Tomiyama H, et al.: "Proximal jejunostomy with or without myectomy-myotomy modification in 5 infants with total intestinal aganglionosis-an experience of surgical treatments in a single institution"Journal of Pediatric Surgery. (in press). (2002)
• [Publications] Shimotake T, Go S, Inoue K, et al.: "A homozygous missense mutation in the tyrosine kinase domain of the RET proto-oncogene in an infant with total intestinal aganglionoses"American Journal of Gastroenterology. 96(4). 1286-1291 (2001)
• [Publications] Inoue K, Shimotake T, Tomiyama H, et al.: "Mutational analysis of the RET and GDNF genes in children with hypoganglionosis"European Journal of Pediatric Surgery. 11(2). 120-123 (2001)