2001 Fiscal Year Annual Research Report
新世代抗体-ミニ抗体-の創製とその臨床分析化学システムへの応用
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13557224
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
小林 典裕 東北大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (90205477)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
後藤 順一 東北大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (80006337)
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| Keywords | 抗体工学 / ミニ抗体 / 臨床分析化学 / 相補性決定部 / 抗体模倣ペプチド / シクロデキストリン |
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| Research Abstract |
抗体は多岐にわたる標的抗原に対して高い特異性と親和力を示すため、臨床化学分析における機能性器材として利用価値が高い。しかし、天然の抗体には分子量が大きいこと(約15万)に起因する種々の制約がある。そこで、抗体工学の技術により天然型抗体の構造と機能を改変して、超高感度・高選択的な臨床化学分析システムの確立に有用な低分子量の抗体模倣ペプチド(ミニ抗体)の創製を企てた。その一環として、副腎皮質ステロイドである11-デオキシコルチゾール(11-DC)及び光学活性薬物である(1R)-ブフラロールをモデル抗原に取り上げ、対応するマウスモノクローナル抗体H鎖及びL鎖の可変部(V_H, V_L)をリンカーペプチドで連結した一本鎖Fvフラグメント(scRv; MW約2.5万)を調製した。これらscFvは、いずれも由来する天然型抗体に遜色のない親和力と特異性を保有することが判明した。さらに、シクロデキストリン(CD)の水酸基を抗体の相補性決定部(CDR)に相当する低分子量のペプチドで修飾した、「合成ミニ抗体(MW<5,00)の創製を企てた。11-DCをモデルゲスト分子としてとりあげ、本化合物に十分な包接能を示すβ-CDの1級水酸基を足掛かりにマレイミド基を導入し、抗11-DCモノクローナル抗体H鎖のCDR3のアミノ酸配列を含む化学合成ペプチド(Biotin-GGGNVRVYAMDYGGC)をC末端のSH基を利用して結合させた。本合成ミニ抗体のトリチウム標識11-DCに対する反応性を調べた結果、β-CD(Ka=2.9x10^3M^<-1>)に比べ5倍程度大きな親和力を獲得したものと推測された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Norihiro Kobayashi: "Noncompetitive immunoassays for small molecules with high sensitivity and specificity"Advances in Clinical Chemistry. 36. 139-170 (2001)
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[Publications] 後藤 順一: "低分子生理活性物質に対する抗体の分子認識とイムノアッセイの高感度化"TDM研究. 18. 77-78 (2001)
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[Publications] Shigeo Ikegawa: "The enantioselective immunoaffinity extraction of an optically active ibuprofen-modified peptide fragment"Analytical Biochemistry. 296. 63-72 (2001)
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[Publications] Nariyasu Mano: "Simultaneous detection of cholyl adenylate and coenzyme A thioester utilizing liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry"Analytical Sciences. 17. 1037-1042 (2001)
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[Publications] Nariyasu Mano: "Characterization of rat liver bile acid acyl glucuronosyltransferase"Steroids. 67. 257-262 (2002)
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[Publications] Norihiro Kobayashi: "A monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay of glycolithocholic acid sulfate in human urine for liver function test"Steroids. (in press).
