唾液腺の形態形成における分枝形成特異的遺伝子の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13640660
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 野川 宏幸 千葉大学, 理学部, 助教授 (40143250)
• Keywords: マウス胚 / 唾液腺 / 分枝形成 / 上皮単独培養 / 成長因子 / 分枝特異的遺伝子 / サブトラクションスクリーニング

Research Abstract

マウス胚唾液腺の分枝形成に関与する遺伝子を探索し,その遺伝子の機能から分枝形成機構を明らかにすることを試みた。分枝形成に関与する遺伝子として,分枝している唾液腺上皮と分枝していない唾液腺上皮との間で発現量に差のある遺伝子をスクリーニングすることにした。唾液腺の場合,単離した上皮を基底膜様物質マトリゲルで覆い,培養液にEGFと血清を加えて培養すると盛んに分枝し,FGF7のみを加えて培養すると分枝せずに伸長する。そこで,両者の間でサブトラクションをおこない,EGF存在下の方で高発現の遺伝子を濃縮した。得られたサブトラクション済み産物をクローニングし,約300クローンの中からFGF7存在下よりEGF存在下で高発現のものを選択し,シーケンスをおこない,その部分配列からホモロジー検索をおこなった。その結果,ESTクローンを含む9個の分枝特異的遺伝子の候補を同定した。
上記の候補遺伝子はインビトロの培養系で発現が上昇しているものであるため,インビボでも分枝特異的に発現が見られるかを検証した。13日胚の唾液腺原基をStalk部分(分枝しない),Lobule部分(分枝する),上皮を含まない間充織の3部分に区分し,14日胚についてはStalk部分,Lobule部分の2部分に区分し,それぞれについてRT-PCRをおこない,各遺伝子の発現量を比較した。Lobule部分でのみ発現が見られ,Stalk部分,間充織では発現が低いものが目的の遺伝子であるが,この発現パターンを示すものは存在しなかった。本研究において,分枝特異的遺伝子を見つけ出すことに一歩近付いたが,まだその確定にはいたっておらず,さらなる研究の持続が必要である。

Research Products

• [Publications] NOGAWA, H., HASEGAWA, Y.: "Sucrose stimulates branching morphogenesis of embryonic mouse lung in vitro : a problem of osmotic balance between lumen fluid and culture medium"Dev. Growth Differ.. 44・5. 383-390 (2002)