2001 Fiscal Year Annual Research Report
酵母Cdkファミリーによる細胞周期制御機構と創薬への応用
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13660099
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
西沢 正文 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20218150)
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| Keywords | 細胞周期 / 酵母 / サイクリン依存性キナーゼ / 糖代謝 / ジーンチップ |
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| Research Abstract |
1.Pho80-Pho85融合タンパク質を用いた解析
別の実験より、diauxic shiftによる遺伝子発現の変化にPho85キナーゼが影響することがわかったため、PHO85およびPHO80-PHO85をテトラサイクリンリプレッサー誘導体により誘導発現する系を構築した。この系をpho85欠失株中に導入し、ドキシサイクリン添加により発現誘導後、0,1,2,4時間後にmRNAを抽出し、cDNAからcRNAに変換してジーンチップ(DNAマイクロアレイ)解析を行い、PHO85およびPHO80-PH085のimmediate targetの探索を試みた。その結果、SWI5およびそれにより制御されるCHS2,EGT2,PCL9、貯蔵糖代謝にかかわるTSL1,GSY1、Pho85のサイクリンであるPCL7メタルセンサーであるCTR3などの発現量が上昇すること、また逆にMAK11,DRS1,PRS3などの発現量が減少することを見いだした。PHO85およびPHO80-PHO85発現誘導時で発現量が変化する遺伝子は多くの場合共通であったが(理由は後述)、PCL7の発現上昇だけはPHO85の発現誘導にのみ観察された。このことはPCL7の発現調節に必要なサイクリンはPho80以外のサイクリンであることを示している。
2.PCL-Pho85融合タンパク質を用いた解析
Pho80以外の9種のサイクリンそれぞれとの融合タンパク質を発現する酵母株を作製し、性質を調べた。その結果、PHO5の発現抑制はPHO80-PHO85、グリコーゲンの正常な代謝はPCL8-PHO85、非発酵性炭素源での生育はPCL6-PHO85をそれぞれ発現している株でのみ見られることがわかった。これらの結果はPho85キナーゼの特定の機能には特定のサイクリンとの組み合わせが必要であることを示している。一方、PCL-PHO85を発現している株の中でPHO5の脱抑制が不完全なものが見られたが、PHO80を欠失させることにより完全な脱抑制が見られるようになった。このことはPho80がPcl-Pho85融合蛋白質に結合している可能性を示している。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] A.Toh-e, M.Nishizawa: "Structure and function of cyclin-dependent Pho85 kinase of Saccharomyces cerevisiae"J.Gen.Appi.Microbiol. 47. 107-118 (2001)
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[Publications] M.Nishizawa: "Negative regulation of transcription by the yeast global transcription factors, Gal11 and Sin4"Yeast. 18. 1099-1110 (2001)
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[Publications] M.Nishizawa: "Pho85 kinase, a yeast cyclin-dependent kinase, regulates the expression of UGP1, encoding UDP-glucose pyrophorylase"Yeast. 18. 239-249 (2001)
