ウシ卵巣での血管作動性腸管収縮ペプチド/エンドセリン2の生理的・病因的役割の解明

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13660308
• Research Institution: Kitasato University
• Principal Investigator: 打出 毅 北里大学, 獣医畜産学部, 講師 (20327456)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 天間 恭介 北里大学, 獣医畜産学部, 教授 (50050654) ; 斉田 要 産業技術総合研究所, 分子細胞, 主任研究官
• Keywords: ウシ / エンドセリン2 / 血管作動性腸管収縮ペプチド / クローニング / 卵巣

Research Abstract

血管作動性腸管収縮ペプチド(VIC)はエンドセリン(ET)ファミリーに属するペプチドであり、ヒトやイヌのET-2に対応するペプチドと考えられている。我々は、ET-2およびVICの生理学的役割をマウスを実験モデルとして検討してきた結果、卵巣機能と密接な関係がある事を示した。そこで、本研究では、このマウスにおけるVICの基礎研究を基にし、ウシ卵巣におけET-2/VICの役割の解明を試みる。牛では、卵巣疾患に由来する繁殖障害が多く見られ、ウシの卵巣を題材とすることは獣医学上意義が大きい。
研究実施計画に沿って本年度は、ウシのET-2/VI C orthologue遺伝子のcDNAクローニングを行った。マウスやラットの研究結果から、VIC遺伝子は腸管で多く発現していることが明らかになっている。そこで本実験では、ウシ腸管をクローニング材料として用いた。ヒト、マウスおよびラットのcDNAで高度に保存されている領域を検索し、その情報を基にしてprimerを設計し、RACE-PCR法によりクローニングを行った。得られた3'RACEおよび5'RACEクローンの塩基配列より、全長cDNAの塩基配列を明らかにした。
得られたcDNAは1247bpより構成されており、177アミノ酸からなる前駆体タンパクをコードする531bpからなるオープンリーディングフレームが存在することが明らかになった。前駆体タンパクには、ETファミリーに特徴的なbig体とlike体領域が確認された。big体には、21アミノ酸からなるmature体領域が確認された。全長cDNA塩基配列によるホモジー解析の結果、得られたcDNAはヒト、マウスおよびラットのcDNAと65%以上の相同性が認められた。今後、得られた塩基配列を基にして、Real time PCR法によるウシET-2/VICmRNAの定量法を確立する。

Research Products

• [Publications] Tsuyoshi Uchide: "Endothelin-1 in smooth muscle cells and mast cells of mouse uterus after parturition"J.Mol.Endocrinol.. 27. 165-173 (2001)
• [Publications] Tsuyoshi Uchide: "Rapid quantification of murine endothelin-1 and vasoactive intestinal contractor gene expression levels by a real-time PCR system"J.Biotechnol.. 84. 187-192 (2000)
• [Publications] Tsuyoshi Uchide: "Quantitative analysis of endothelin-1 and vasoactive intestinal contractor/endothelin-2 gene expression in rats by real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction"J.Cardiovasc.Pharmacol.. 36. S5-S8 (2000)
• [Publications] Tsuyoshi Uchide: "Fluctuating gene expression and localized cellular distribution of vasoactive intestinal contractor (VIC) in mouse uterus"J.Histochem.Cytochem.. 48. 699-707 (2000)