2001 Fiscal Year Annual Research Report

cAMPによるチロシンリン酸化を介したクロライド輸送制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number	13670046
Research Institution	Kyoto Prefectural University of Medicine
Principal Investigator	新里直美京都府立医科大学, 医学部, 助手 (00237645)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	丸中良典京都府立医科大学, 医学部, 教授 (00127036)
Keywords	チロシンリン酸化 / クロライド輸送
Research Abstract	腎遠位尿管細胞由来培養細胞を用いて、チロシンリン酸化を介したcAMPによるクロライド輸送制御機構の解明を目指した研究を遂行し、平成13年度には以下のことを明らかにした。 1.cAMP刺激は2相性の持続的なクロライド輸送を促進し、このクロライド輸送はチロシンリン酸化酵素阻害剤であるtyrphostin A23の前処理により完全に抑制されるが、不活性型の構造類似体tyrphostin A63によっては、何ら影響を受けなかった。この結果より、cAMP依存的なクロライド輸送は、チロシンリン酸化酵素による制御を受けていることが示された。 2.cAMP依存的なクロライド輸送は、クロライド輸送の放出過程を担うクロライドチャネルと取込み過程を担うブメタニド感受性共輸送体の2つの過程から構成されている。そこで、チロシンリン酸化の阻害機序を明らかにするために、チロシンリン酸化酵素阻害剤(tyrphostin A23)存在下で、クロライドコンダクタンスを測定したところ、部分的な阻害を受けていたが、完全には阻害されなかった。この結果から、チロシンリン酸化依存的な制御を受けているのは、主にクロライド輸送の取込み過程を担うブメタニド感受性共輸送体であることが示された。 3.さらに、cAMP刺激は、実際にチロシンリン酸化酵素を活性化し、チロシンリン酸化を変化させているかを、ウエスタンブロッティング法で調べた。cAMP刺激は、いくつかのタンパク質(〜60 kDa,120〜130kDa,〜200kDa)のチロシンリン酸化の増大を引き起こしており、これらのタンパク質チロシンリン酸化が、クロライド輸送制御に関与している可能性が示唆された。今後は、cAMP依存的なクロライド輸送に関与しているチロシンリン酸化酵素の同定とその活性化機序の解明を目指すものである。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Naomi Niisato: "Forskolin Activation of Apical Cl^-channel and Na^+/K^+/2Cl^-cotranspurter via a PTK-Dependent Pathway in Renal Epithelium"Biochem.Biophys.Res Commun. 285. 880-884 (2001)
[Publications] Yoshinori Marunaka: "Effects of Ca^<2+> channel blockers on amiloride-sensitive Na^+-permeable channels and Na^+ transport in fetal rat alveolar type II epithelium"Biochemical Pharmacology. (in press). (2002)
[Publications] Yoshinori Marunaka: "Osmopregulation of sodiumtransport in renal epithelial-cells"Electrolyte Transport Across Exocrine Epithelia. 15-20 (2001)
[Publications] Naomi Niisato: "PTK-dependent regulation of CAMP-stimulated Cl^-transport in renal A6 cells"Electrolyte Transport Across Exocring Epithelia. 141-143 (2001)
[Publications] Naomi Niisato: "Activation of CFTR Cl^-channel by tyrphestins via a protein tyrosine kinase-independent pathway in forskolin-stimulated renal epithelial A6 cells"Life Sciences. (in press). (2002)
[Publications] 中丸良典: "肺組織におけるイオン輸送の役割"臨床呼吸生理. 33・1. 29-36 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

cAMPによるチロシンリン酸化を介したクロライド輸送制御機構の解明

Principal Investigator

新里 直美 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (00237645)

Research Products

[Publications] Naomi Niisato: "Forskolin Activation of Apical Cl^-channel and Na^+/K^+/2Cl^-cotranspurter via a PTK-Dependent Pathway in Renal Epithelium"Biochem.Biophys.Res Commun. 285. 880-884 (2001)

[Publications] Yoshinori Marunaka: "Effects of Ca^<2+> channel blockers on amiloride-sensitive Na^+-permeable channels and Na^+ transport in fetal rat alveolar type II epithelium"Biochemical Pharmacology. (in press). (2002)

[Publications] Yoshinori Marunaka: "Osmopregulation of sodiumtransport in renal epithelial-cells"Electrolyte Transport Across Exocrine Epithelia. 15-20 (2001)

[Publications] Naomi Niisato: "PTK-dependent regulation of CAMP-stimulated Cl^-transport in renal A6 cells"Electrolyte Transport Across Exocring Epithelia. 141-143 (2001)

[Publications] Naomi Niisato: "Activation of CFTR Cl^-channel by tyrphestins via a protein tyrosine kinase-independent pathway in forskolin-stimulated renal epithelial A6 cells"Life Sciences. (in press). (2002)

[Publications] 中丸 良典: "肺組織におけるイオン輸送の役割"臨床呼吸生理. 33・1. 29-36 (2001)

新里直美京都府立医科大学, 医学部, 助手 (00237645)

[Publications] 中丸良典: "肺組織におけるイオン輸送の役割"臨床呼吸生理. 33・1. 29-36 (2001)