SAA1遺伝子プロモーター領域によるSAA産生調節の解明と治療への応用

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13670479
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 寺井 千尋 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (40188660)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 梶山 浩 東京女子医科大学, 医学部, 助手 ; 小関 由美 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (30266837)
• Keywords: 関節リウマチ / 続発性アミロイドーシス / SAA / SAA1 / 遺伝子 / プロモーター / ハプロタイプ / RAGE

Research Abstract

続発性アミロイドーシスは関節リウマチ患者死因の上位をしめる重篤な病態で、その沈着アミロイドは血清アミロイドA(SAA)に由来する。SAA1 geneのexon 3多型(SAA1α,β,γ)の検討により、SAA1 γ遺伝子が危険因子と判明した。当グループはSAA1 geneプロモーター領域の解析により新たに3SNP_Sを見いだし、その中の-13T/C SNPの-13TはSAA1 γよりも密接にアミロイドーシス発症に関連し、SAA1 γhaplotypeはこの-13Tと強い連鎖不平衡にあることを報告した。
SAA1プロモーター多型による転写活性の違いを検討するために、プロモーターの3SNP_S(-61 C/G,-13 C/T,-2 G/A)を含む領域をPCR増幅し(プロモーターSNP_Sの組み合わせにより4種類のハプロタイプC-C-G、G-C-G、G-C-A、C-T-Gが存在する)、レポーターベクターに挿入後、Hep G2細胞にトランスフェクションした。SAA1プロモーターはIL-1βとIL-6刺激により、ルシフェラーゼ活性を示した。ハプロタイプ間に活性の差がみられ、-13Tを有するC-T-Gハプロタイプの活性が最も高値であった。これはアミロイドーシス発症の危険因子である-13T変異がSAA1 mRNA産生亢進に関与する可能性を示す。
次にサイトカイン(IL-1βとIL-6)刺激後のHep G2細胞の核抽出液と、プロモーター領域128bpをカバーするプローブでゲルシフトアッセイを行い、転写因子の結合を確認した。-13 C/Tを含むオリゴプローブとNFκB認識配列をもつオリゴプローブを用いたゲルシフトアッセイにより、NFκBのプロモーター部分への結合、-13Tを含む配列によるNFκB認識配列へのNFκB結合増加の知見をえた。

Research Products

• [Publications] Terai C, Kaneko H, Koseki Y, Kajiyama H, Maury CPJ, et al.: "SAA1 gene analysis in the patients with AA-amyloidosis from three different populations"Arthritis Rheumatism. 46(9). S549 (2002)
• [Publications] Kaneko H, Terai C, Moriguchi M, Koseki Y, Kajiyama H, Kamatani N: "Up-regulation of transcriptional activity by a single nucleotide polymorphism at the 5´ flanking region of SAA1 gene that was associatedwith risk for AA-amyloidosis secondary to RA"Arthritis Rheumatism. 44(9). S358 (2001)
• [Publications] Moriguchi M, Terai C, Koseki Y, Uesato M, Nishikawa T, Kamatani N: "Influence of serum amyloid A (SAA) on lipid metabolism in patients with rheumatoid arthritis (RA)"Amyloid. 8(2). 115-120 (2001)
• [Publications] Moriguchi M, Terai C, Kaneko H, Koseki Y, Kajiyama H, Uesato M, Inada S, Kamatani N: "A novel single-nucleotide polymorphism at the 5'-flanking region of SAA1 associated with risk of type AA amyloidosis secondary to rheumatoid arthritis"Arthritis Rheumatism. 44. 1266-1272 (2001)