糖鎖調節による肝細胞癌治療の試み

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13670500
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 青柳 豊 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (00142266)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 健司 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (00303123) ; 小谷 昌司 新潟大学, 理学部, 教授 (60018702)
• Keywords: 肝細胞癌 / 糖鎖 / アルファフェトプロテイン / フコース転移酵素 / アンチセンスオリゴヌクレオチド / フコシル化分画

Research Abstract

α1-6フコース,転移酵素のアンチセンスRNAによる発現抑制実験として、本酵素のmRNA(GenBank Accession No.D89289)の861〜874塩基、5-CACTCATCTTGGA-3'、に対するセンスならびにアンチセンス合成RNAを用いた。各RNAは、リボースの2'位のOHに対し2-methoxyethylを結合させ、また、ヌクレオチドのリン酸基の非結合酸素をS原子に置き換えるPhosphorothioate修飾を加えた。HepG2細胞を48時間培養した後の培養上清中のアルファーフェトプロテイン濃度とそのフコシル化分画は、2.8±0.29ng/ml、84.6±3.4%であった。FuGENE6(Roche、USA)を用いて上記のセンス、あるいはアンチセンスRNAをHepG2細胞にリポフェクションにより導入し、24時間後に培養上清を回収、さらに培養を続け48時間後に培養上清ならびに細胞を回収した。センス、アンチセンス、ならびにFuGENE6単独の各群を調整し、各培養上清中のアルファーフェトプロテイン濃度とフコシル化分画を測定した。各群における24時間後、48時間後のアルファーフェトプロテイン濃度はそれぞれ、5.2ng/ml、2.4ng/ml(センス)、3.6ng/ml、1.8ng/ml(アンチセンス)、7.6ng/ml、3.7ng/ml(FuGENE6)であった。次に、Microcon(Millipore、USA)を用いアルファーフェトプロテイン濃度を20ng/ml程度まで濃縮し、フコシル化分画を測定した。各群のフコシル化分画は、77.4%、79.7%(センス)、80.4%、70.1%(アンチセンス)、79.0%、80.8%(FuGENE6)であり、アンチセンス導入群の48時問後に採集された培養上清中でフコシル化分画が低下している事が示唆された。現在、同様の検討を多系列で行うと伴に、細胞内のα1-6フコース転移酵素活性の定量的評価を行っている。また、同様の実験をIII, V型グルコサミン糖転移酵素に関しても施行していく予定である。

Research Products

• [Publications] Odani S, Baba K, Tsuchida Y, Aoyagi Y, Wakui S, Takahashi Y: "Hepatic fatty acid-binding proteins of a Teleost, Lateolabrax japonicus, the primary structures and location of a disulfide bond"Journal of Biochemistry. 129. 69-76 (2001)
• [Publications] Shoji Y, Mita T, Isemura M, et al.: "A fibronectin-binding protein from rice bran with cell adhesion activity for animal tumor cells"Biosci. Biotechnol. Biochem.. 65. 1181-1186 (2001)
• [Publications] Seki K, Suda T, Aoyagi Y, et al.: "Diagnosis of pancreatic adenocarcinoma by detection of hTERT mRNA in pancreatic juice with sample qualification"Clin Cancer Res. 7. 1976-1981 (2001)
• [Publications] Furukawa K, Hrada T, AoyagiY: "Successful endoscopic sphincoterotomy using a papillotome tipped with a balloon for cases of choledocholithiasis complicated by duodenal diverticula"Am J Gastroenterol. 96. 3215-3216 (2001)
• [Publications] Aoyagi Y, Mita Y, Suda T, et al.: "The fucosylation index of serum α-fetoprotein as useful prognostic factor in patients with hepatocellular carcinoma in special reference to chronological changes"Hepatolgy Res. (in press). (2002)
• [Publications] Suda T, Fujiyama A, Takimoto M, et al.: "Interchromosomal telomere length variation"Biochem Bioph Res Comm. (in press). (2002)
• [Publications] Asakura H, Aoyagi Y, Nakazawa S: "Trend in Gastroenterology and Hepatology"Springer-Verlag Tokyo. 370 (2001)