血管側浸透圧がマクラデンサ細胞に与える影響の検討と浸透圧受容体のクローニング

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671119
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 井上 武明 熊本大学, 医学部附属病院, 助手 (90322312)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 野々口 博史 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (30218341) ; 冨田 公夫 熊本大学, 医学部, 教授 (40114772)
• Keywords: osomosensor / Macula densa細胞 / Sho1 / primary culture

Research Abstract

(1)mouse osmosensorのクローニング: S. cerevisiaeのosmosensorであるSho1と相同性が高く,他の既知のcDNAとの相同性が低い部位で多数のdegenerative primerを作成し,これを使ったdegenerative PCRを行った。シークエンスを行ったがmammalianのosmosensorの可能性が高いPCR産物は今のところ得られていない。
(2)MD細胞の培養: SV40 large T-antigenのtransgenic mouseの腎皮質をtrypsinとcollagenaseで処理した後、集合尿細管の糖残基であるDolichos biflorus lectinをFITCで、MD細胞、集合尿細管および近位尿細管のS1とS2分節の糖残基であるHelix pomatia lectinをphycoerythrin (PE)で標識する。標識されていない細胞を除いた後、顕微鏡下でPE-positiveでFITC-negativeな細胞を回収し培養する。この培養細胞をクローン化し、増殖したクローンをMD細胞のmarkerであるCOX-2、bNOS、NKCC2、oxytocin、集合尿細管細胞のvasopressin receptor type2、Henle上行脚太い部のTamm-Horfall protein、近位尿細管のglucose-6-phosphataseのmRNAに対するprimerを用いたRT-PCRでスクリーニングしMD細胞のクローンを同定している。

Research Products

• [Publications] Nonoguchi.H. et al.: "Angiotensin-converting enzyme inhibitor withdrawal and ACE gene polymorphism"Clin. Nephrol.. (in press).
• [Publications] Inoue T. et al.: "The effects of vasopressin and atrial natriuretic peptide in the collecting duct"Cardiovascular Research. 51. 470-480 (2001)