cDNAマイクロアレイを用いたラット大量肝切除後肝不全の発症機序の解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671322
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 渡会 伸治 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (10244477)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡崎 康司 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (80280733) ; 林崎 良英 理化学研究所, ゲノム科学総合研究センター(研究職), プロジェクトディレクター (70192705) ; 石川 孝 横浜市立大学, 医学部, 助手 (80275049)
• Keywords: liver failure / hepatectomy / cDNA microarra / apoptosis

Research Abstract

Wistar系雄生8〜12週齢ラットを用い、肝切除率90%、95%のモデルと、対照としてのsham operationモデルをそれぞれ作製した。肝切除後経時的(1,3,6,12,24時間)にラットを犠牲死させ、残肝を採取、AGPC変法にてTotal RNAを抽出、oligo-dT primerとCy3-dUTP、Cy5-dUTP、super script II reverse transcriptaseを用いmRNAをcDNAに逆転写、ラベリングを行った。それぞれの肝切除群と、対照群よりラベリングしたprobe cDNAを競合的にmouse 40K microarrayにハイブリダイゼーションさせる。Microarrayのsignalをscanningし、Cy3、Cy5のsignal intensityをそれぞれ定量的に測定し、肝切除群と対照群の遺伝子発現プロファイルの差異の情報を得た。Gene-Spring(silicon genetics社)クラスター解析プログラムを用いて、遺伝子発現の変化を解析した。
その結果95%(過大量)肝切除モデル群は90%(許容量)肝切除モデル群と比較し、apoptosis関連因子では、Fas, caspase8, IL-18の早期よりの高発現とBcl-2の低発現を認めた。cell proliferation関連因子ではp21の早期からの高発現を認めた。HSPは全体に低発現であった。
以上の結果を、5^<th>IHPBA(第5回国際肝胆膵疾患会議、14年4月、東京)で発表した。
その後、得られた結果から、Fasやp21などのRT-PCRによるmRNA発現、免疫組織染色を用いた蛋白発現を検討し、validationとした。

Research Products

• [Publications] Nishizuka I, Togo S et al.: "Analysis of Gene Expression Involved in Brain Metastasis from Brest Cancer Using cDNA Microarray"Brest Cancer. 9(1). 26-32 (2002)
• [Publications] 石川孝, 渡会伸治, 他: "マウスcDNAマイクロアレイを用いた癌関連遺伝子の発現解析"ゲノム医学. 2(1). 19-27 (2002)
• [Publications] Takeda K, Togo S, et al.: "Clinicohistological features of liver failure after excessive hepatectomy"Hepato-Gastoenterology. 49. 354-358 (2002)
• [Publications] Nagano Y, Togo S et al.: "Improved functional reserve of hypertrophied contra lateral liver after Portal vein ligation in rats"J.Hepatology. 37(7). 72-77 (2002)
• [Publications] Ichikawa Y, Togo S et al.: "Identification of genes regulating colorectal carcinogenesis by using the algorithm for diagnosing malignant state method"Biochemical and Biophysical Research Communications. 296. 497-506 (2002)
• [Publications] Morita T, Togo S et al.: "Mechanism of postoperative liver failure after excessive hepatectomy investigated using a cDNA microarray"J Hepatobiliary Pancreat Surg. 9. 352-359 (2002)