p53標的遺伝子発現プロファイリングによる肺癌の遺伝子治療の治療耐性機構の解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671390
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 藤原 俊義 岡山大学, 医学部・附属病院, 助手 (00304303)
• Keywords: p53 / 遺伝子治療 / 肺癌 / アデノウイルスベクター / 治療抵抗性

Research Abstract

癌細胞へのp53遺伝子導入により、その標的遺伝子の発現がどのように変化するかを定量的に解析するシステムを樹立した。具体的には、real-time RT-PCR法を用いて、p53標的遺伝子の発現変化を検討した。まず、in vitroでp53遺伝子を欠失している非小細胞肺癌細胞H1299にp53遺伝子発現アデノウイルスベクター(Ad5CMV-p53)を感染させ、そのp53遺伝子発現の増強に伴う標的遺伝子の発現変化を観察した。検討した遺伝子は、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子p21、アポトーシス誘導因子p53AIP1、Noxa、p53の分解に関与する癌遺伝子MDM2、およびDNA修復に重要なp53R2である。いずれの標的遺伝子もp53遺伝子導入後24時間をピークに発現増強が認められた。さらに、in vivoでの標的遺伝子発現の誘導を検討した。ヌードマウスにH1299細胞を移植し、直径が5-7mmになった時点でAdCMV-p53ベクターを腫瘍内に局所投与し、経時的に採取した腫瘍片から抽出したRNAを用いてreal-time RT-PCRを行った。in vitroのデータと同様に24時間後をピークにp53AIP1、Noxa、MDM2、p21遺伝子の発現増強がみられた。現在、p21遺伝子プロモーターに駆動されるGFP遺伝子発現プラスミドをトランスフェクションしたH1299細胞株を樹立しており、GFP-H1299腫瘍にAd5CMV-p53ベクターを投与してそのプロモーター活性の動きを経時的に観察する予定である。