MXRを過剰発現する多剤耐性ヒト癌細胞における耐性機構の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671659
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: 西山 賢龍 鹿児島大学, 医学部附属病院, 講師 (80264422)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 久保 博幸 鹿児島大学, 医学部附属病院, 助手 (60336344)
• Keywords: MXR / 多剤耐性 / GS-Xポンプ

Research Abstract

(1)MXRのアミノ酸配列をもとに15塩基の合成オリゴペプチドを作成,これを免疫原としてウサギ抗血清を調整した。MXRを発現しているdoxorubicin耐性ヒト乳癌細胞株(MCF7 AdVp3000)とその親細胞株(MCF7)についてイムノブロット法により解析したところ,MCF7 AdVp3000において約70kDaのバンドが認められ,MXRを認識していると考えられた。免疫染色ではMCF7 AdVp3000細胞において,主に細胞膜が染色された。MXRは細胞膜に存在して,何らかの輸送機構に関与していると考えられた。
(2)20例の腎細胞癌組織におけるMXRの発現をPCR法により調べた。発現レベルは低かったが,正常腎組織より発現が亢進しており,腎細胞癌における薬剤耐性への関与が示唆された。
(3)Flow cytometryによる解析で,MCF7 Advp3600細胞においてP-gpの基質であるrhodamine 123のATP依存性の細胞外排出を認めた。しかし,P-gp阻害剤であるPSC833はこの排出を阻害しなかった。また,MRPの基質であるcalceinの排出は認められなかった。MXRはP-gpやMRPとは異なる輸送スペクトルを有すると考えられた。
(4)MCF7 AdVp3000細胞から調整した膜小胞はATP依存性にleukotrien C4(LTC4)を小胞内に取り込んだ。この取り込みはMXRの阻害剤と考えられているnovobiocinにより阻害された。MRPの基質であるestradiol-17-β-D-glucuronideの取り込みは認められず,また,GS-platinumはLTC4の取り込みを阻害しなかった。MXRはMRPやCDDP耐性細胞に発現するGS-Xポンプとは異なる基質特異性をもったGS-Xポンプである可能性が示唆された。