ニトロソ化による内因性プロテアーゼインヒビターの活性増強

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671931
• Research Institution: Fukuoka Dental College
• Principal Investigator: 上西 秀則 福岡歯科大学, 歯学部, 教授 (90084300)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 赤池 孝章 熊本大学, 医学部, 助教授 (20231798) ; 竹内 尚子 福岡歯科大学, 歯学部, 助手 (50198800) ; 小倉 理恵子 福岡歯科大学, 歯学部, 助手 (80320331) ; 濱本 高義 化学及血清療法研究所, 研究員
• Keywords: Porphylomonas gingivalis / プロテアーゼ / プロテアーゼインヒビター / ニトロソ化 / α2アンチプラスミン / α1プロテアーゼインヒビター / vesicle

Research Abstract

本研究で我々はα2プラスミンインヒビター(α2PI)のS-ニトロソ化について実験を行った。α2PIはジチオスレイトール(DTT)を用いて還元した。還元処理後のDTT除去には透析膜を用いるよりも、ゲルろ過で行うほうが優れていた。還元α2PIのニトロソ化はイソペンチールナイトライトを使用した。α2PIのS-ニトロソ化の効率は60〜85%であった。
1)α2PIはセリンプロテアーゼに対するインヒビターに分類されるが、歯周病原菌のひとつであるPorphylomonas gingivalisが産生するシステインプロテアーゼ(RGP)の活性を阻害することがわかった。また、ニトロソ化α2PI(S-NO-α2PI)はインタクトのα2PIよりも約20%強いプロテアーゼの阻害化成を示した。
2)P.gingivalisは菌体外にvesicleを放出する。このvesicleは菌体の外膜成分からなるもので、菌から分泌されるプロテアーゼを含むことから、菌の病原因子の一つとして考えられている。
(1)vesicleをα2PIおよびS-NO-α2PIで処理すると、そのプロテアーゼ活性の40〜60%が阻害された。
(3)RAW264細胞をvesicleで処理するとNOの産生誘導が観察される。しかし、α2PIあるいはS-NO-α2PI処理されたvesicleではNO産生誘導が10%抑制された。このことから、α2PIおよびS-NO-α2PIはP.gingivalisの病原作用を減弱させることが推察される。
3)α1プロテアーゼインヒビター(α1PI)およびニトロソ化α1PI(S-NO-α1PI)はP.gingivalis由来プロテアーゼ活性を阻害しなかった。

Research Products

• [Publications] 上西秀則, 小倉理恵子 ほか: "ニトロソ化によるα2プラスミンインヒビターの活性増強"医学と生物学. (in press). (2004)
• [Publications] 上西秀則, 長 環, 小倉理恵子: "真菌の遺伝学"日本臨牀. 61. 785-792 (2003)
• [Publications] Inoue Y., Fukushima T., et al.: "Antibacterial characteristics of newly developed amphiphilic lipids and DNA-lipid complexes against bacteria."J.Biomed.Mater.Res.. 65A. 203-208 (2003)
• [Publications] Cho T., Tpyoda M., et al.: "Isolation and sequencing of the Candida albicans MSI3, a putative novel member of the HSP70 family."Yeast. 20. 149-156 (2002)